| 目录 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 骨肉瘤耐ADM细胞株的建立及其耐药机制 | 第18-36页 |
| 1 研究目的 | 第18页 |
| 2 实验材料 | 第18-20页 |
| ·细胞株 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要实验仪器 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| 3 实验方法 | 第20-27页 |
| ·细胞复苏 | 第20页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·细胞传代 | 第20页 |
| ·细胞计数 | 第20-21页 |
| ·细胞冻存 | 第21页 |
| ·耐药株的建立 | 第21页 |
| ·药敏实验 | 第21-22页 |
| ·耐药株细胞耐药稳定性检测 | 第22页 |
| ·光镜及透射电镜观察细胞形态 | 第22页 |
| ·细胞生长曲线和细胞群体倍增时间的测定 | 第22-23页 |
| ·Rh123蓄积实验 | 第23页 |
| ·RT-PCR检测MDR1、MRP1、Survivin mRNA表达 | 第23-25页 |
| ·Western blot检测P-gp、MRP1、Survivin蛋白表达 | 第25-27页 |
| ·统计学处理 | 第27页 |
| 4 结果 | 第27-32页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2耐药细胞的建立及耐药稳定性 | 第27-28页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞的多药耐药性 | 第28-29页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞形态学观察 | 第29页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞生长情况 | 第29-30页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞Rh123蓄积实验 | 第30-31页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞MDR1、MRP1、Survivin mRNA的表达 | 第31页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2细胞P-gp、MRP1、Survivin蛋白的表达 | 第31-32页 |
| 5 讨论 | 第32-35页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2耐药株的建立 | 第32-33页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2耐药株生物学特性 | 第33页 |
| ·U2OS/ADM1、U2OS/ADM2的耐药机制 | 第33-35页 |
| 6 小结 | 第35-36页 |
| 第二章 片仔癀对人骨肉瘤U2OS/ADM2细胞的作用 | 第36-48页 |
| 1 研究目的 | 第36页 |
| 2 实验材料 | 第36页 |
| ·细胞及细胞培养 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要实验仪器 | 第36页 |
| 3 实验方法 | 第36-38页 |
| ·药物配制 | 第36页 |
| ·MTT法检测片仔癀对U2OS/ADM2增殖的影响 | 第36-37页 |
| ·MTT法确定片仔癀联用浓度的确定 | 第37页 |
| ·MTT法检测片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
| ·Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态 | 第38页 |
| ·AnnexinV-FITC/PI双染FCM检测细胞凋亡 | 第38页 |
| ·统计学方法 | 第38页 |
| 4 结果 | 第38-45页 |
| ·片仔癀对U2OS/ADM2细胞增殖抑制和促凋亡作用 | 第38-42页 |
| ·片仔癀联用浓度的确定 | 第42-43页 |
| ·片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
| ·片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞凋亡的影响 | 第44-45页 |
| 5 讨论 | 第45-47页 |
| 6 小结 | 第47-48页 |
| 第三章 片仔癀逆转人骨肉瘤U2OS/ADM2细胞耐药的机制 | 第48-59页 |
| 1 研究目的 | 第48页 |
| 2 实验材料 | 第48页 |
| ·细胞及细胞培养 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要实验仪器 | 第48页 |
| 3 实验方法 | 第48-50页 |
| ·流式细胞术检测片仔癀对U2OS/ADM2细胞内Rh123蓄积的影响 | 第48页 |
| ·流式细胞术检测片仔癀对U2OS/ADM2细胞内ADM蓄积的影响 | 第48-49页 |
| ·RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Survivin、MDR1mRNA的表达 | 第49页 |
| ·Western blot检测Bcl-2、Bax、Survivin、P-gp蛋白的表达 | 第49-50页 |
| ·统计学方法 | 第50页 |
| 4 结果 | 第50-56页 |
| ·片仔癀对U2OS/ADM2细胞Bcl-2、Bax、Survivin表达的影响 | 第50-51页 |
| ·片仔癀对U2OS/ADM2细胞P-gp表达的影响 | 第51-54页 |
| ·片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞Bcl-2、Bax、Survivin mRNA表达的影响 | 第54页 |
| ·片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞P-gp表达的影响 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-58页 |
| 6 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 片仔癀对人骨肉瘤U2OS/ADM2细胞裸鼠移植瘤的作用 | 第59-70页 |
| 1 研究目的 | 第59页 |
| 2 实验材料 | 第59-60页 |
| ·实验用裸鼠 | 第59页 |
| ·细胞株 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| 3 实验方法 | 第60-62页 |
| ·骨肉瘤裸鼠移植瘤模型的建立 | 第60页 |
| ·实验动物分组及干预措施 | 第60页 |
| ·绘制肿瘤生长曲线 | 第60页 |
| ·肿瘤抑制率 | 第60-61页 |
| ·标本处理 | 第61页 |
| ·HE染色 | 第61页 |
| ·原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡 | 第61-62页 |
| ·RT-PCR检测Bcl-2、Bax、MDR1 mRNA的表达 | 第62页 |
| ·统计学方法 | 第62页 |
| 4 结果 | 第62-67页 |
| ·裸鼠移植瘤模型的建立 | 第62页 |
| ·片仔癀、片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用 | 第62-64页 |
| ·片仔癀、片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞裸鼠移植瘤病理形态的影响 | 第64页 |
| ·片仔癀、片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞裸鼠移植瘤凋亡的影响 | 第64-66页 |
| ·片仔癀、片仔癀与ADM联用对U2OS/ADM2细胞裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax MDR1mRNA表达的影响 | 第66-67页 |
| 5 讨论 | 第67-69页 |
| 6 小结 | 第69-70页 |
| 总结与分析 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 文献综述 | 第80-85页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 作者简介 | 第85-86页 |
