| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 縮略语表 | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-36页 |
| ·捻转血矛线虫简介 | 第14-15页 |
| ·捻转血矛线虫的危害 | 第14页 |
| ·捻转血矛线虫的形态特征及其生活史 | 第14-15页 |
| ·捻转血矛线虫的流行病学特点 | 第15页 |
| ·捻转血矛线虫的症状及病理变化 | 第15页 |
| ·感染阶段(iL3)对H. contortus存活的生物学意义 | 第15-16页 |
| ·滞育机制(dauer)在C. elegans中的研究进展 | 第16-19页 |
| ·鸟苷酸环化酶信号传导通路(Guanylyl cyclase pathway) | 第17页 |
| ·胰岛素样生长因子信号传导通路(Insulin-like signalling pathway) | 第17-18页 |
| ·TGFβ样生长因子信号传导通路(TGFβ-like pathway) | 第18页 |
| ·类固醇激素样通路(Steroid hormone pathway) | 第18-19页 |
| ·胰岛素样信号通路在哺乳动物、果蝇和C elegans中的研究 | 第19-24页 |
| ·胰岛素样受体 | 第20-21页 |
| ·磷脂酰肌醇3-激酶(PI3Ks) | 第21-23页 |
| ·3-磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶(PDK-1) | 第23-24页 |
| ·滞育机制在寄生线虫中的研究 | 第24-26页 |
| ·H contortus iL3与C.elegans dauer的相似特点 | 第24-25页 |
| ·“dauer hypothesis”或“Daf-c paradigm”在寄生线虫中的研究 | 第25-26页 |
| ·RNAi和转基因技术在动物寄生线虫基因功能研究中的应用 | 第26-36页 |
| ·RNAi在动物寄生线虫中的应用 | 第26-31页 |
| ·转基因技术在动物寄生线虫中的应用 | 第31-36页 |
| 2 研究目的与意义 | 第36-37页 |
| 3 材料与方法 | 第37-65页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第37-39页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要溶液的配制 | 第38-39页 |
| ·试验方法 | 第39-65页 |
| ·捻转血矛线虫各发育阶段虫体的收集 | 第39页 |
| ·引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| ·捻转血矛线虫DNA的提取及ITS-2鉴定 | 第40-45页 |
| ·捻转血矛线虫L3幼虫RNA的提取 | 第45-46页 |
| ·Hc-daf-2,Hc-age-1,Hc-aap-1和Hc-pdk-1全长cDNA编码区的获得 | 第46-50页 |
| ·Hc-daf-2,Hc-age-1,Hc-aap-1和Hc-pdk-1全长gDNA的获得 | 第50页 |
| ·Hc-daf-2,Hc-age-1,Hc-aap-1和Hc-pdk-1上游启动子序列的获得 | 第50-53页 |
| ·基因启动子定位质粒的构建 | 第53-56页 |
| ·转基因质粒的构建 | 第56页 |
| ·显微注射方法的建立 | 第56-58页 |
| ·基因救援法评估Hc-daf-2和Hc-age-1基因的功能 | 第58-60页 |
| ·捻转血矛线虫各发育阶段转录水平分析 | 第60-61页 |
| ·基因的原核表达 | 第61-63页 |
| ·酵母双杂交验证Hc-age-1 p85结合区和Hc-aap-1基因互作 | 第63-64页 |
| ·生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 4 结果和分析 | 第65-105页 |
| ·捻转血矛线虫各个发育阶段的收集及鉴定 | 第65-66页 |
| ·捻转血矛线虫各个发育阶段的收集 | 第65-66页 |
| ·捻转血矛线虫ITS-2序列鉴定 | 第66页 |
| ·捻转血矛线虫胰岛素样受体(Hc-daf-2)基因的结构与功能研究 | 第66-82页 |
| ·Hc-daf2 EST序列的分离 | 第66-68页 |
| ·Hc-daf-2全长cDNA序列的获得 | 第68-71页 |
| ·Hc-daf-2全长gDNA序列的获得 | 第71-73页 |
| ·Hc-daf-2基因上游启动子序列的获得 | 第73-75页 |
| ·Hc-daf-2基因各个发育阶段转录水平分析 | 第75-76页 |
| ·Hc-daf-2基因启动子定位的研究 | 第76-78页 |
| ·Hc-daf2基因功能的研究 | 第78-81页 |
| ·Hc-daf-2基因LD和TK功能区域的原核表达 | 第81-82页 |
| ·捻转血矛线虫磷脂酰肌醇3-激酶基因的结构与功能研究 | 第82-100页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1的分离 | 第82-85页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1结构的分析 | 第85-87页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1启动子的获得 | 第87-89页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1转基因质粒的构建 | 第89-92页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1各个发育阶段转录水平分析 | 第92-94页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1启动子定位研究 | 第94-97页 |
| ·酵母双杂交验证Hc-age-1和Hc-aap-1互相作用 | 第97-99页 |
| ·Hc-age-1的功能分析 | 第99-100页 |
| ·捻转血矛线虫3-磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶基因结构与功能研究 | 第100-105页 |
| ·Hc-pdk-1的分离 | 第100-101页 |
| ·Hc-pdk-1启动子区域的获得 | 第101-102页 |
| ·Hc-pdk-1在各个发育阶段转录水平分析 | 第102-103页 |
| ·Hc-pdk-1启动子定位质粒的构建 | 第103页 |
| ·Hc-pdk-1启动子定位的研究 | 第103-105页 |
| 5 讨论 | 第105-114页 |
| ·捻转血矛线虫(H.contortus)实验材料的获得 | 第105页 |
| ·发育调控机制对寄生线虫发育的重要性 | 第105-106页 |
| ·异源转基因技术在H contorts基因功能研究中的应用 | 第106-107页 |
| ·胰岛素样受体(Hc-daf-2)基因结构与功能的研究 | 第107-110页 |
| ·Hc-daf-2基因的序列分析 | 第107-108页 |
| ·Hc-daf-2基因在各个发育阶段转录水平分析 | 第108页 |
| ·Hc-daf-2基因功能分析 | 第108-109页 |
| ·部分救援的可能性因素 | 第109-110页 |
| ·磷脂酰肌醇3-激酶(P13Ks)(Hc-age-1和Hc-aap-1)基因结构与功能的研究 | 第110-112页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1基因序列分析 | 第110页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1基因在各个发育阶段转录水平分析 | 第110-111页 |
| ·Hc-age-1和Hc-aap-1基因功能的研究 | 第111-112页 |
| ·3-磷脂酰肌醇依赖性蛋白激酶(Hc-pdk-1)基因结构与功能的研究 | 第112-114页 |
| ·Hc-pdk-1基因序列分析 | 第112页 |
| ·Hc-pdk-1基因启动子表达模式的分析 | 第112-114页 |
| 6 结论 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 附录1 | 第133-136页 |
| 附录2 | 第136-139页 |
| 附录3 | 第139页 |
