| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-40页 |
| ·聚γ-谷氨酸 | 第16-21页 |
| ·聚γ-谷氨酸简介 | 第16页 |
| ·聚γ-谷氨酸生物合成微生物 | 第16-18页 |
| ·微生物生物合成聚γ-谷氨酸的影响因素 | 第18-21页 |
| ·聚γ-谷氨酸微生物合成 | 第21-34页 |
| ·内源谷氨酸合成 | 第21-27页 |
| ·胞外谷氨酸运输 | 第27-28页 |
| ·聚γ-谷氨酸聚合 | 第28-33页 |
| ·聚γ-谷氨酸的胞外降解 | 第33-34页 |
| ·微生物胞内谷氨酸合成相关酶 | 第34-39页 |
| ·谷氨酰胺合成酶 | 第34-35页 |
| ·谷氨酸合成酶 | 第35页 |
| ·谷氨酸脱氢酶 | 第35-39页 |
| ·研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 地衣芽胞杆菌WX-02谷氨酸脱氢酶对聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第40-71页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-44页 |
| ·培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第40-41页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·PCR引物 | 第41-43页 |
| ·工具酶及试剂 | 第43页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第43页 |
| ·主要实验仪器 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-52页 |
| ·核酸水平操作 | 第44-45页 |
| ·基因工程菌株构建 | 第45-48页 |
| ·摇瓶发酵培养条件 | 第48页 |
| ·生物量检测 | 第48页 |
| ·残留葡萄糖测定 | 第48-49页 |
| ·聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第49页 |
| ·胞内代谢物浓度测定 | 第49-50页 |
| ·胞外代谢物浓度测定 | 第50页 |
| ·基因转录分析 | 第50-51页 |
| ·数据处理 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-67页 |
| ·地衣芽胞杆菌工程菌株构建 | 第52-56页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对菌体生长的影响 | 第56-57页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对发酵过程pH的影响 | 第57-58页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对菌体葡萄糖利用能力的影响 | 第58-59页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对发酵残留柠檬酸的影响 | 第59页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对菌体胞内谷氨酸节点产物的影响 | 第59-61页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对主要溢流代谢产物的影响 | 第61-62页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对聚γ-谷氨酸产量的影响 | 第62-63页 |
| ·谷氨酸脱氢酶和谷氨酸合成酶对主要有机酸代谢产物的影响 | 第63-64页 |
| ·谷氨酸脱氢酶对相关基因转录的影响 | 第64-66页 |
| ·谷氨酸合成酶对相关基因转录的影响 | 第66页 |
| ·rocG基因缺失和gltA基因缺失对gudB基因转录的影响 | 第66-67页 |
| ·gudB基因上游序列分析 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-71页 |
| 第三章 地衣芽胞杆菌谷氨酸脱氢酶基因的克隆和功能鉴定 | 第71-88页 |
| ·前言 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71-73页 |
| ·PCR引物 | 第71-72页 |
| ·菌株与质粒 | 第72页 |
| ·培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第72页 |
| ·工具酶及试剂 | 第72页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第72-73页 |
| ·主要实验仪器 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-77页 |
| ·工程菌株建 | 第73页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第73-74页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白表达产物 | 第74页 |
| ·蛋白纯化 | 第74页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第74-75页 |
| ·粗酶液制备 | 第75页 |
| ·酶活测定 | 第75页 |
| ·谷氨酸脱氢酶活测定 | 第75-76页 |
| ·数据处理 | 第76-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-86页 |
| ·谷氨酸脱氢酶蛋白序列多重比对 | 第77-78页 |
| ·重组菌株构建 | 第78-80页 |
| ·谷氨酸脱氢酶RocG蛋白的诱导与纯化 | 第80-81页 |
| ·谷氨酸脱氢酶RocG蛋白浓度测定 | 第81-82页 |
| ·pH对谷氨酸脱氢酶活性影响 | 第82页 |
| ·pH对谷氨酸脱氢酶稳定性的影响 | 第82-83页 |
| ·温度对谷氨酸脱氢酶活性的影响 | 第83页 |
| ·温度对谷氨酸脱氢酶稳定性的影响 | 第83-84页 |
| ·谷氨酸脱氢酶动力学分析 | 第84-85页 |
| ·地衣芽胞杆菌发酵过程中谷氨酸脱氢酶活性检测 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 第四章 乙醛酸循环对地衣芽胞杆菌聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第88-104页 |
| ·前言 | 第88页 |
| ·实验材料 | 第88-90页 |
| ·菌株和质粒 | 第88-89页 |
| ·PCR引物 | 第89页 |
| ·培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第89页 |
| ·工具酶及试剂 | 第89-90页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第90页 |
| ·主要实验仪器 | 第90页 |
| ·实验方法 | 第90-91页 |
| ·核酸水平操作 | 第90页 |
| ·基因工程菌株构建 | 第90页 |
| ·摇瓶发酵培养条件 | 第90页 |
| ·生物量检测 | 第90页 |
| ·残留葡萄糖测定 | 第90页 |
| ·聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第90页 |
| ·胞内代谢物浓度测定 | 第90页 |
| ·胞外代谢物浓度测定 | 第90页 |
| ·基因转录分析 | 第90页 |
| ·数据处理 | 第90-91页 |
| ·结果与分析 | 第91-99页 |
| ·地衣芽胞杆菌工程菌株构建 | 第91-93页 |
| ·乙醛酸循环对菌体生长的影响 | 第93-94页 |
| ·乙醛酸循环对发酵过程pH的影响 | 第94页 |
| ·乙醛酸循环对菌体葡萄糖利用能力的影响 | 第94-95页 |
| ·乙醛酸循环对胞内相关代谢产物的影响 | 第95-96页 |
| ·乙醛酸循环对聚γ-谷氨酸产量的影响 | 第96-97页 |
| ·乙醛酸循环对主要溢流代谢产物的影响 | 第97-98页 |
| ·乙醛酸循环对相关基因转录的影响 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-104页 |
| 第五章 谷氨酸降解酶对地衣芽胞杆菌聚γ-谷氨酸合成影响 | 第104-122页 |
| ·前言 | 第104页 |
| ·实验材料 | 第104-106页 |
| ·培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第104页 |
| ·工具酶及试剂 | 第104页 |
| ·抽提液和缓冲液 | 第104页 |
| ·主要实验仪器 | 第104-105页 |
| ·菌株和质粒 | 第105页 |
| ·PCR引物 | 第105-106页 |
| ·实验方法 | 第106-108页 |
| ·核酸水平操作 | 第106页 |
| ·基因工程菌株构建 | 第106页 |
| ·摇瓶发酵培养条件 | 第106页 |
| ·生物量检测 | 第106-107页 |
| ·残留葡萄糖测定 | 第107页 |
| ·残留谷氨酸测定 | 第107页 |
| ·聚γ-谷氨酸浓度测定 | 第107页 |
| ·胞内代谢物浓度测定 | 第107页 |
| ·胞外代谢物浓度测定 | 第107页 |
| ·基因转录分析 | 第107页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶PgdS酶活测定 | 第107页 |
| ·聚γ-谷氨酸相对分子量测定 | 第107页 |
| ·数据处理 | 第107-108页 |
| ·结果与分析 | 第108-118页 |
| ·地衣芽胞杆菌工程菌株构建 | 第108-110页 |
| ·不同菌株聚γ-谷氨酸降解酶酶活检测 | 第110页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对菌体生长的影响 | 第110-111页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对发酵过程pH的影响 | 第111页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对菌体葡萄糖利用能力的影响 | 第111-112页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对发酵残留谷氨酸的影响 | 第112-113页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对胞内谷氨酸节点产物的影响 | 第113-114页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对主要溢流代谢产物的影响 | 第114-115页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对聚γ-谷氨酸产量的影响 | 第115-116页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对胞外主要有机酸代谢产物的影响 | 第116页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对聚γ-谷氨酸分子量的影响 | 第116-117页 |
| ·聚γ-谷氨酸降解酶对相关基因转录的影响 | 第117-118页 |
| ·讨论 | 第118-122页 |
| 第六章 结论与展望 | 第122-125页 |
| ·结论 | 第122-123页 |
| ·展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 在读期间发表论文 | 第143页 |
