| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 縮略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-30页 |
| ·α -半乳糖苷酶的研究进展 | 第11-26页 |
| ·α-半乳糖苷酶的概述 | 第11页 |
| ·α-半乳糖苷酶的来源和分类 | 第11-16页 |
| ·α-半乳糖苷酶的生理意义 | 第16-17页 |
| ·α-半乳糖苷酶的生化性质 | 第17-18页 |
| ·α-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第18-19页 |
| ·第4家族糖苷水解酶的研究进展 | 第19-22页 |
| ·α-半乳糖苷酶的工业上的应用与研究进展 | 第22-26页 |
| ·酶的理性设计和定点突变技术 | 第26-28页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-53页 |
| ·材料 | 第30-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第30-31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·试验相关溶液 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-53页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| ·产α-半乳糖苷酶菌株的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组JmelA的构建 | 第36-39页 |
| ·阳性克隆的筛选与质粒提取 | 第39-40页 |
| ·alph-半乳糖苷酶的表达与纯化 | 第40-43页 |
| ·Alpha-半乳糖苷酶酶学性质的研究 | 第43-48页 |
| ·α-半乳糖苷酶底物专一性分析 | 第48页 |
| ·JmelA的定点突变与保守位点的饱和突变 | 第48-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-72页 |
| ·菌株的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| ·Bacillus sp.总DNA的抽提 | 第53页 |
| ·菌株的16SrDNA鉴定 | 第53-54页 |
| ·α -半乳糖苷酶基因的PCR扩增 | 第54页 |
| ·序列分析 | 第54-56页 |
| ·JmelA基因及其编码的氨基酸序列分析 | 第54-55页 |
| ·JmelA与不同物种melA关系分析 | 第55-56页 |
| ·JmelA的表达纯化 | 第56-57页 |
| ·目的基因片段的双酶切后与载体酶连 | 第56页 |
| ·抽提转化子质粒,检测插入的目的片段 | 第56页 |
| ·JmelA蛋白诱导表达 | 第56-57页 |
| ·JmelA的酶学性质分析 | 第57-68页 |
| ·Bradford法测蛋白浓度标准曲线 | 第57页 |
| ·pNPG标准曲线的绘制 | 第57-58页 |
| ·DNS法标准曲线的绘制 | 第58页 |
| ·辅因子对酶活性的影响曲线 | 第58-60页 |
| ·α -半乳糖苷酶最适pH和最佳温度 | 第60-61页 |
| ·对棉籽糖、水苏糖的最适pH和最佳温度的测定 | 第61-63页 |
| ·α -半乳糖苷酶pH耐受性和温度耐受性分析 | 第63-64页 |
| ·金属离子和化学试剂对α-半乳糖苷酶活性的影响 | 第64-66页 |
| ·薄层层析(TLC)分析木糖苷酶水解木寡糖的产物 | 第66-67页 |
| ·对不同底物的动力学参数测定 | 第67-68页 |
| ·JmelA的结构模拟 | 第68-70页 |
| ·定点突变结果 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-76页 |
| ·JmelA基因的克隆 | 第72页 |
| ·重组α-半乳糖苷酶的酶学性质研究 | 第72-73页 |
| ·辅因子浓度摸索及温度、pH及金属离子对酶活性影响分析 | 第72-73页 |
| ·JmelA底物特异性分析 | 第73页 |
| ·JmelA定点突变相关研究 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-87页 |
| 附录 | 第87-91页 |
| 1. α -半乳糖苷酶的核苷酸及氨基酸序列 | 第87-90页 |
| 2. 公开发表和拟发表文章收录情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |