| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第13-20页 |
| ·苏云金芽胞杆菌生物学性质 | 第13-14页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白 | 第14-20页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白基因的分类及杀虫谱 | 第14-17页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的结构和功能 | 第17-18页 |
| ·Cry2类蛋白简介 | 第18页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的表达与调控 | 第18-20页 |
| ·转录水平的调控 | 第18-19页 |
| ·转录后水平的调控 | 第19-20页 |
| ·全局性转录调控因子 | 第20-21页 |
| ·CcpA | 第20页 |
| ·TnrA | 第20-21页 |
| ·CodY的研究进展 | 第21-29页 |
| ·全局性转录调控因子CodY概述 | 第21-22页 |
| ·CodY的结构 | 第22-23页 |
| ·CodY蛋白的效应物分子 | 第23页 |
| ·CodY的结合热点研究 | 第23-24页 |
| ·CodY在Bs中的作用 | 第24-26页 |
| ·CodY蛋白在其它革兰氏阳性菌中的作用 | 第26-29页 |
| ·化脓性链球菌球菌 | 第26-27页 |
| ·金黄色葡萄球菌 | 第27页 |
| ·难辨梭状芽胞杆菌 | 第27-28页 |
| ·乳酸乳球菌 | 第28页 |
| ·李斯特菌 | 第28-29页 |
| ·粪肠球菌 | 第29页 |
| ·炭疽芽胞杆菌 | 第29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-45页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第31-33页 |
| ·培养基配制及主要成分 | 第33页 |
| ·抗生素及其使用浓度 | 第33页 |
| ·试剂和仪器 | 第33-36页 |
| ·常用试剂 | 第33页 |
| ·常用缓冲液和溶液 | 第33-35页 |
| ·质粒和总DNA抽提、感受态制备所需试剂 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE所用溶液 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌表达、纯化及蛋白含量测定试剂 | 第35页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第35页 |
| ·常用仪器 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-45页 |
| ·DNA操作的方法 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第36页 |
| ·Bt质粒的抽提 | 第36-37页 |
| ·Bt总DNA的抽提 | 第37页 |
| ·RNA抽提操作方法 | 第37-38页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第38-42页 |
| ·连接反应体系 | 第38页 |
| ·E.coli感受态细胞制备与转化 | 第38-39页 |
| ·Bt感受态细胞制备与转化 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·RT-PCR | 第40-42页 |
| ·SDS-PAGE电泳及Western blot分析 | 第42页 |
| ·Western blot操作流程 | 第42页 |
| ·非变性PAGE胶检测RNA | 第42-43页 |
| ·透射电子显微镜镜检实验流程 | 第43页 |
| ·PHB的提取与检测 | 第43页 |
| ·同源双交换操作流程 | 第43-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-64页 |
| ·Bt中CodY生物信息学分析 | 第45-46页 |
| ·CodY蛋白在大肠杆菌中表达及纯化 | 第46-47页 |
| ·过表达CodY蛋白工程菌YBT-881-L1的构建与鉴定 | 第47-56页 |
| ·过表达CodY蛋白重组载体的构建 | 第47-48页 |
| ·过表达CodY蛋白工程菌YBT-881-L1的构建 | 第48-49页 |
| ·YBT-881及YBT-881-L1的质粒验证 | 第49-50页 |
| ·YBT-881-L1蛋白SDS-PAGE比较分析 | 第50-51页 |
| ·BMB171-L1和YBT-881-L1蛋白SDS-PAGE比较分析 | 第51-52页 |
| ·YBT-881-L1中晶体蛋白基因PCR验证 | 第52-53页 |
| ·YBT-881-L1生长曲线及相差显微镜镜检 | 第53-54页 |
| ·cry2Ac基因的RT-PCR验证 | 第54-55页 |
| ·cry2Ac在大肠杆菌中克隆及表达 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56页 |
| ·cody基因敲除 | 第56-64页 |
| ·cody咖基因敲除突变株的构建 | 第56-58页 |
| ·BMB171cody-中CodY蛋白Western blot鉴定 | 第58页 |
| ·BMB171cody-中cody基因RT-PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·BMB171cody-相差显微镜镜检 | 第59-60页 |
| ·BMB171cody~-1Ac~+相差显微镜镜检 | 第60-61页 |
| ·BMB171cody~-和BMB171透射电镜镜检 | 第61页 |
| ·BMB171cody~-和BMB171中PHB的含量测定 | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
