| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-19页 |
| 符号说明 | 第19-22页 |
| 前言 | 第22-31页 |
| 参考文献 | 第25-31页 |
| 第一部分 南蛇藤提取物通过降低VEGF-C的表达抑制肝癌淋巴管生成的体外研究 | 第31-69页 |
| 1 材料 | 第32-38页 |
| ·药材 | 第32页 |
| ·细胞株 | 第32页 |
| ·实验试剂 | 第32-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35-38页 |
| ·细胞培养主要试剂配方 | 第35页 |
| ·细胞免疫组化主要试剂配方 | 第35-36页 |
| ·Western blot主要试剂配方 | 第36-38页 |
| 2 方法 | 第38-48页 |
| ·药物准备 | 第38页 |
| ·细胞培养 | 第38页 |
| ·MTT法检测COE对人肝癌细胞及人淋巴管内皮细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| ·凋亡分析 | 第39-40页 |
| ·TUNEL法检测COE对人肝癌细胞凋亡的影响 | 第39页 |
| ·流式细胞术检测COE对人肝癌细胞凋亡的影响 | 第39-40页 |
| ·Transwell小室法检测COE对人肝癌细胞迁移能力的影响 | 第40页 |
| ·实时荧光定量(realtime quantitative)PCR法检测COE对对人肝癌细胞VEGF-CmRNA表达水平的影响 | 第40-43页 |
| ·人肝癌细胞总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·逆转录(RT)合成cDNA | 第41-42页 |
| ·realtime PCR反应 | 第42-43页 |
| ·ELISA法检测COE对人肝癌细胞培养上清液中VEGF-C蛋白含量的影响 | 第43-44页 |
| ·细胞免疫组化法检测COE对人肝癌细胞VEGF-C蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| ·Western blot分析 | 第45-47页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第45页 |
| ·细胞浆和线粒体中细胞蛋白的提取 | 第45-46页 |
| ·蛋白定量 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第46页 |
| ·转印及封闭 | 第46-47页 |
| ·抗体杂交 | 第47页 |
| ·ECL化学发光,显影及定影 | 第47页 |
| ·管道形成实验检测COE对人淋巴管内皮细胞(HLECs)体外管样结构形成的影响 | 第47页 |
| ·统计学处理 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-61页 |
| ·COE化学成分分析及鉴定 | 第48页 |
| ·COE抑制人肝癌细胞的增殖 | 第48-50页 |
| ·COE诱导人肝癌细胞凋亡 | 第50-52页 |
| ·COE诱导人肝癌细胞Cyt-c释放、Bax/Bcl-2比值升高及Caspase-3、PARP的活化 | 第52-53页 |
| ·COE抑制人肝癌细胞的迁移 | 第53-54页 |
| ·COE对人淋巴管内皮细胞(HLECs)增殖及管样结构形成的抑制作用 | 第54-56页 |
| ·COE抑制人肝癌细胞VEGF-C的表达水平 | 第56-58页 |
| ·COE对人肝癌细胞VEGF-C mRNA表达水平的影响 | 第56页 |
| ·COE对人肝癌细胞VEGF-C蛋白表达水平的影响 | 第56-58页 |
| ·COE抑制人肝癌细胞CXCR4的表达水平 | 第58-59页 |
| ·COE对人肝癌细胞MAPKs信号通路中ERKI/2、JNK和p38MAPK蛋白磷酸化水平的影响 | 第59-60页 |
| ·COE对人肝癌细胞Akt磷酸化表达水平的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 第二部分 南蛇藤提取物抑制肝癌裸鼠移植瘤淋巴管生成的作用及机制研究 | 第69-91页 |
| 1 材料 | 第69-72页 |
| ·药材 | 第69页 |
| ·细胞株和实验动物 | 第69-70页 |
| ·细胞株 | 第69页 |
| ·实验动物 | 第69-70页 |
| ·实验试剂 | 第70-71页 |
| ·实验仪器 | 第71页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-76页 |
| ·造模与给药 | 第72-73页 |
| ·细胞培养与悬液制备 | 第72页 |
| ·人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立 | 第72-73页 |
| ·给药方法 | 第73页 |
| ·观察指标及测定 | 第73-75页 |
| ·肿瘤体积 | 第73页 |
| ·抑瘤率 | 第73页 |
| ·ELISA法检测COE对荷瘤裸鼠血清VEGF-C表达的影响 | 第73-74页 |
| ·组织切片制备 | 第74页 |
| ·HE染色 | 第74页 |
| ·TUNEL法检测COE对裸鼠移植瘤组织细胞凋亡的影响 | 第74-75页 |
| ·免疫组化法检测COE对荷瘤裸鼠瘤组织VEGF-C、VEGFR-3、LYVE-1、CXCR4、p-ERK及p-AKT表达的影响 | 第75页 |
| ·免疫标记评估标准及统计方法 | 第75页 |
| ·统计分析 | 第75-76页 |
| 3 结果 | 第76-86页 |
| ·COE对荷瘤裸鼠一般情况的影响 | 第76页 |
| ·COE对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响 | 第76-78页 |
| ·COE对荷瘤裸鼠各脏器指数的影响 | 第78-79页 |
| ·COE对移植瘤内肿瘤细胞凋亡的影响 | 第79-80页 |
| ·COE降低荷瘤裸鼠血清VEGF-C的表达量 | 第80-81页 |
| ·COE对移植瘤内肿瘤细胞VEGF-C表达的影响 | 第81页 |
| ·COE对移植瘤内微淋巴管密度的影响 | 第81-83页 |
| ·COE对移植瘤内肿瘤细胞CXCR4表达的影响 | 第83-84页 |
| ·COE对移植瘤内肿瘤细胞p-ERK1/2表达的影响 | 第84-85页 |
| ·COE对移植瘤内肿瘤细胞p-AKT表达的影响 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 小结 | 第91-92页 |
| 综述一 | 第92-104页 |
| 参考文献 | 第98-104页 |
| 综述二 | 第104-113页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第114-115页 |
| 攻读学位期间获得的奖项 | 第115-116页 |
