| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·乳腺发育和泌乳 | 第12-20页 |
| ·乳腺发育和泌乳调节机制 | 第12页 |
| ·泌乳信号通路及其研究进展 | 第12-18页 |
| ·氨基酸调节乳腺泌乳 | 第18-20页 |
| ·蛋白质组学研究 | 第20-25页 |
| ·蛋白质组研究技术 | 第20-24页 |
| ·细胞核蛋白质组研究进展 | 第24页 |
| ·磷酸化蛋白质组研究进展 | 第24-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-52页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第26-27页 |
| ·实验试剂 | 第26页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-51页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与鉴定 | 第27-28页 |
| ·细胞核磷酸化蛋白质组筛选差异表达的蛋白质 | 第28-39页 |
| ·MAPK1 和 eEF1B 的功能分析 | 第39-44页 |
| ·免疫沉淀及 GST-pull down 分析 | 第44-51页 |
| ·数据处理 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-78页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞的原代培养与鉴定 | 第52-53页 |
| ·细胞核磷酸化蛋白质组筛选差异表达的蛋白质 | 第53-59页 |
| ·蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞的最佳作用时间及浓度筛选 | 第53-54页 |
| ·双向电泳分析细胞核磷酸化蛋白质 | 第54-57页 |
| ·实时荧光定量 PCR 验证差异表达的蛋白质 | 第57-58页 |
| ·Western blotting 验证差异表达的蛋白质 | 第58-59页 |
| ·激光共聚焦分析 MAPK1 和 eEF1B 的表达 | 第59-62页 |
| ·MAPK1 和 eEF1B 基因沉寂 | 第62-65页 |
| ·MAPK1 和 eEF1B 基因过表达 | 第65-72页 |
| ·真核表达载体 pGCMV-IRES-EGFP-MAPK1 和 pGCMV-IRES-EGFP- eEF1B 的构建 | 第65-67页 |
| ·真核表达载体 pGCMV-IRES-EGFP-MAPK1 和 pGCMV-IRES-EGFP- eEF1B 的瞬时转染 | 第67-70页 |
| ·真核表达载体 pGCMV-IRES-EGFP-MAPK1 和 pGCMV-IRES-EGFP- eEF1B 的稳定转染 | 第70-72页 |
| ·免疫沉淀及 GST-Pull down 分析 | 第72-78页 |
| ·原核表达载体 pGEX-4T-1-MAPK1 和 pGEX-4T-1-eEF1B 的构建 | 第72-74页 |
| ·蛋白质相互作用分析 | 第74-78页 |
| 4 讨论 | 第78-86页 |
| ·奶牛乳腺上皮细胞系的的建立 | 第78页 |
| ·细胞核磷酸化蛋白双向电泳 | 第78-83页 |
| ·细胞核磷酸化蛋白提取 | 第78-80页 |
| ·细胞核磷酸化蛋白双向电泳 | 第80页 |
| ·质谱鉴定结果生物信息学分析 | 第80-83页 |
| ·荧光定量 PCR 和 Western blotting 验证差异蛋白质的 mRNA 和蛋白表达 | 第83页 |
| ·MAPK1 和 eEF1B 对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号转导途径的影响 | 第83-85页 |
| ·eEF1B 对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号转导途径的影响 | 第84页 |
| ·MAPK1 对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号转导途径的影响 | 第84-85页 |
| ·细胞免疫沉淀和 GST-pull down 分析 | 第85-86页 |
| 5 结论 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第98页 |
