中文摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-22页 |
引言 | 第22-23页 |
第一章 MSCs 减轻急性腹膜纤维化的研究 | 第23-111页 |
第一节 MSCs 减轻急性腹膜纤维化的疗效研究 | 第23-52页 |
一、 前言 | 第23-24页 |
二、 实验材料、主要试剂与仪器 | 第24-25页 |
三、 实验方法 | 第25-34页 |
(一) 细胞培养 | 第25-30页 |
(二) 实验动物处理 | 第30-31页 |
(三) 腹膜粘连肉眼评分 | 第31页 |
(四) 病理 HE 染色 | 第31页 |
(五) 病理 Masson 三色染色 | 第31-32页 |
(六) 免疫组化分析 | 第32-33页 |
(七) 腹膜组织的免疫荧光分析 | 第33页 |
(八) 原代 RPMCs 机械性划伤模型 | 第33页 |
(九) 机械性划伤的 RPMCs 迁移速度测定 | 第33-34页 |
(十) RPMCs 的免疫荧光分析 | 第34页 |
(十一)统计学处理 | 第34页 |
四、 结果 | 第34-46页 |
(一) 特征性表面标志物鉴定 | 第34-35页 |
(二) MSCs 成骨分化潜能的鉴定 | 第35-36页 |
(三) MSCs 成脂分化潜能的鉴定 | 第36页 |
(四) MSCs 治疗急性腹膜粘连的最佳注射方式与时间点 | 第36-37页 |
(五) 尾静脉注射 MSCs 可减轻急性腹膜粘连程度 | 第37-38页 |
(六) 尾静脉注射 MSCs 可减轻急性腹膜粘连的病理改变 | 第38-40页 |
(七) 尾静脉注射 MSCs 可改善急性腹膜粘连的炎症、纤维化反应 | 第40-42页 |
(八) 尾静脉注射 MSCs 可促进损伤 PMCs 的修复 | 第42-44页 |
(九) 原代 RPMSCs 培养的鉴定 | 第44页 |
(十) MSCs 促进体外 RPMSCs 机械性损伤的修复-迁移能力 | 第44-45页 |
(十一)MSCs 促进体外 RPMSCs 机械性损伤的修复-增殖能力 | 第45-46页 |
五、 讨论 | 第46-49页 |
六、 小结 | 第49页 |
七、 参考文献 | 第49-52页 |
第二节 MSCs 减轻急性腹膜纤维化的作用方式研究 | 第52-76页 |
一、 前言 | 第52页 |
二、 实验材料、主要试剂与仪器 | 第52-54页 |
(一) 实验动物与细胞 | 第52-53页 |
(二) 主要试剂 | 第53页 |
(三) 主要仪器 | 第53-54页 |
(四) 其他 | 第54页 |
三、 实验方法 | 第54-59页 |
(一) SD 大鼠骨髓来源 MSCs 培养与操作 | 第54-56页 |
(二) 实验动物处理 | 第56-58页 |
(三) 小动物活体成像技术示踪 MSCs | 第58页 |
(四) 双光子显微镜技术示踪 MSCs | 第58页 |
(五) 免疫荧光分析 | 第58-59页 |
(六) 腹膜粘连肉眼评分 | 第59页 |
(七) 病理 Masson 三色染色 | 第59页 |
(八) 统计学处理 | 第59页 |
四、 结果 | 第59-69页 |
(一) 尾静脉注射 MSCs 不在大鼠损伤的腹膜区域积聚 | 第59-60页 |
(二) 尾静脉注射 MSCs 主要在大鼠肺脏积聚 | 第60-61页 |
(三) 尾静脉注射 MSCs 在大鼠肺脏中未被巨噬细胞吞噬 | 第61-62页 |
(四) 腹腔注射 MSCs 不在大鼠损伤的腹膜区域积聚 | 第62-63页 |
(五) 腹腔注射 MSCs 主要在大鼠脾脏积聚 | 第63-64页 |
(六) 腹腔注射 MSCs 在大鼠脾脏中被巨噬细胞吞噬 | 第64-65页 |
(七) 腹腔注射 MSCs 不在 SCID 小鼠损伤的腹膜区域积聚 | 第65-66页 |
(八) 尾静脉注射 MSCs-CM 可减轻急性腹膜粘连程度 | 第66-67页 |
(九) 尾静脉注射 MSCs-CM 可减轻急性腹膜粘连的病理改变 | 第67-69页 |
五、 讨论 | 第69-71页 |
六、 小结 | 第71页 |
七、 参考文献 | 第71-76页 |
第三节 MSCs 通过分泌方式减轻急性腹膜纤维化的机制研究 | 第76-111页 |
一、 前言 | 第76-77页 |
二、 实验材料、主要试剂与仪器 | 第77-79页 |
(一) 实验动物与细胞 | 第77页 |
(二) 主要试剂 | 第77-78页 |
(三) 主要仪器 | 第78页 |
(四) 其他 | 第78-79页 |
三、 实验方法 | 第79-90页 |
(一) 细胞培养 | 第79-83页 |
(二) 抗体芯片检测无血清 MSCs-CM 细胞因子成分 | 第83-84页 |
(三) RT-PCR | 第84-85页 |
(四) Western blot | 第85-86页 |
(五) 原代 RPMCs 机械性划伤模型 | 第86页 |
(六) 机械性划伤的 RPMCs 迁移速度测定 | 第86页 |
(七) RPMCs 的免疫荧光分析 | 第86-87页 |
(八) 实验动物处理 | 第87-88页 |
(九) 腹膜粘连肉眼评分 | 第88页 |
(十) 病理 Masson 三色染色 | 第88-89页 |
(十一)ELISA 检测 TSG-6 浓度 | 第89页 |
(十二)免疫荧光分析 | 第89-90页 |
(十三)统计学处理 | 第90页 |
四、 结果 | 第90-105页 |
(一) 抗体芯片技术检测无血清 MSCs-CM 中细胞因子分泌的变化 | 第90-92页 |
(二) ELISA 验证无血清 MSCs-CM 中 TSG-6 分泌的变化 | 第92-93页 |
(三) 尾静脉注射 MSCs 后大鼠血清中 TSG-6 浓度一过性升高 | 第93页 |
(四) 尾静脉注射后在肺脏中积聚的 MSCs 表达 TSG-6 | 第93-94页 |
(五) 腹腔注射后在脾脏中积聚的 MSCs 不表达 TSG-6 | 第94-95页 |
(六) mRNA 水平 TSG-6-siRNA 的 knockdown 效果 | 第95-96页 |
(七) 细胞蛋白水平 TSG-6-siRNA 的 knockdown 效果 | 第96-97页 |
(八) siRNA 对 MSCs 分泌 TSG-6 的 knockdown 效果 | 第97-98页 |
(九) 尾静脉注射 TSG-6-siRNA MSCs 大鼠血清 TSG-6 无明显升高 | 第98-99页 |
(十) 尾静脉注射后在肺脏中积聚的 TSG-6-siRNA MSCs 不明显表达 TSG-6 | 第99-100页 |
(十一)MSCs 分泌 TSG-6 促进 RPMSCs 机械损伤修复-迁移能力 | 第100-101页 |
(十二)MSCs 分泌 TSG-6 促进 RPMSCs 机械损伤修复-增殖能力 | 第101-102页 |
(十三)MSCs 可通过分泌 TSG-6 减轻急性腹膜粘连程度 | 第102-103页 |
(十四)MSCs 可通过分泌 TSG-6 减轻急性腹膜粘连的病理改变 | 第103-105页 |
五、 讨论 | 第105-106页 |
六、 小结 | 第106页 |
七、 参考文献 | 第106-111页 |
第二章 MSCs 减轻慢性腹膜纤维化的研究 | 第111-135页 |
第一节 MSCs 减轻慢性腹膜纤维化的疗效研究 | 第111-135页 |
一、 前言 | 第111页 |
二、 实验材料、主要试剂与仪器 | 第111-113页 |
(一) 实验动物与细胞 | 第111-112页 |
(二) 主要试剂 | 第112页 |
(三) 主要仪器 | 第112页 |
(四) 其他 | 第112-113页 |
三、 实验方法 | 第113-117页 |
(一) 细胞培养 | 第113-114页 |
(二) 实验动物处理 | 第114-115页 |
(三) 病理 Masson 三色染色 | 第115页 |
(四) 腹膜超滤量检测 | 第115页 |
(五) 腹膜葡萄糖转运量检测 | 第115-116页 |
(六) 病理 HE 染色 | 第116页 |
(七) 免疫组化分析 | 第116-117页 |
(八) 统计学处理 | 第117页 |
四、 结果 | 第117-130页 |
(一) MSCs 治疗慢性腹膜纤维化的最佳注射时间点 | 第117-118页 |
(二) 尾静脉注射 MSCs 可改善腹膜透析的腹膜超滤功能 | 第118-119页 |
(三) 尾静脉注射 MSCs 可降低腹膜透析的腹膜葡萄糖转运功能 | 第119-120页 |
(四) 尾静脉注射 MSCs 可减轻腹膜透析的腹膜纤维化程度 | 第120-122页 |
(五) 尾静脉注射 MSCs 可降低腹膜透析的腹膜血管密度 | 第122-124页 |
(六) 尾静脉注射 MSCs 可抑制腹膜透析 PMCs 的减少 | 第124-126页 |
(七) 尾静脉注射 MSCs 可减少腹膜透析腹膜肌成纤维细胞数量 | 第126-128页 |
(八) 尾静脉注射 MSCs 可减少腹膜透析腹膜 TGF-β1 表达 | 第128-130页 |
五、 讨论 | 第130-132页 |
六、 小结 | 第132页 |
七、 参考文献 | 第132-135页 |
第三章 全文总结 | 第135-136页 |
第四章 文献综述 | 第136-176页 |
第一节 MSCs 简介 | 第137-139页 |
一、 MSCs 的发现简史 | 第137页 |
二、 MSCs 的多向分化潜能 | 第137-138页 |
三、 MSCs 的表面标志物 | 第138-139页 |
第二节 MSCs 发挥治疗效应的作用方式 | 第139-141页 |
一、 MSCs 的定植作用方式 | 第139-140页 |
二、 MSCs 的旁分泌作用方式 | 第140-141页 |
第三节 MSCs 促进损伤修复、抗纤维化的作用机制 | 第141-147页 |
一、 趋化 | 第142页 |
二、 免疫调节 | 第142-144页 |
三、 抑制炎症反应 | 第144-145页 |
四、 抗菌 | 第145页 |
五、 活化内源性干/祖细胞 | 第145页 |
六、 降低内皮细胞通透性 | 第145页 |
七、 促进新生血管生成 | 第145-146页 |
八、 抗凋亡 | 第146页 |
九、 抗纤维化 | 第146-147页 |
第四节 MSCs 治疗各器官、组织损伤与纤维化的研究 | 第147-153页 |
一、 关节 | 第147页 |
二、 肺脏 | 第147-148页 |
三、 肝脏 | 第148-149页 |
四、 神经系统 | 第149-150页 |
五、 心脏 | 第150-151页 |
六、 肾脏 | 第151-153页 |
第五节 临床试验研究 | 第153-154页 |
第六节 MSCs 治疗的副作用 | 第154-156页 |
第七节 小结及现存问题 | 第156页 |
参考文献 | 第156-176页 |
致谢 | 第176-177页 |
个人简历 | 第177-178页 |
在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第178-179页 |