| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-22页 |
| ·桂花研究进展 | 第10-12页 |
| ·工艺、形态和品种分类研究 | 第10-11页 |
| ·花瓣衰老研究 | 第11-12页 |
| ·植物衰老分子水平研究进展 | 第12-20页 |
| ·植物衰老理论概说 | 第12-13页 |
| ·植物细胞程序性死亡研究进展 | 第13-20页 |
| ·植物PCD的特征 | 第13-14页 |
| ·植物衰老、逆境与PCD | 第14-15页 |
| ·PCD机理研究 | 第15-18页 |
| ·PCD调控基因研究 | 第18-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 2.试验材料与方法 | 第22-34页 |
| ·试验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·采样方法 | 第22-23页 |
| ·菌株、载体 | 第23页 |
| ·试剂盒 | 第23页 |
| ·常用试剂 | 第23页 |
| ·常用缓冲液、溶液及培养基的配制 | 第23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·测序 | 第23-24页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第24页 |
| ·试验方法 | 第24-34页 |
| ·桂花花瓣总RNA的提取 | 第24-26页 |
| ·RNA提取过程应注意事项 | 第24页 |
| ·几种不同方法提取桂花花瓣总RNA | 第24-26页 |
| ·CTAB法提取花瓣总RNA | 第24-25页 |
| ·Trizol Kit法提取桂花花瓣总RNA | 第25页 |
| ·改进的Trizol法提取桂花花瓣总RNA | 第25-26页 |
| ·桂花Actin基因和DAD-1同源基因片段的克隆 | 第26-34页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第26页 |
| ·Primer Design | 第26-30页 |
| ·Actin基因引物设计 | 第26-27页 |
| ·DAD-1同源基因简并引物设计 | 第27-30页 |
| ·Real Time PCR引物设计 | 第30页 |
| ·PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·Actin基因PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·DAD-1基因巢式PCR扩增 | 第31页 |
| ·Real Time PCR | 第31-32页 |
| ·PCR产物检测 | 第32页 |
| ·PCR产物的回收 | 第32页 |
| ·回收片段的连接 | 第32-33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第33页 |
| ·测序 | 第33页 |
| ·克隆片段序列及分析 | 第33-34页 |
| 3.结果与分析 | 第34-43页 |
| ·桂花花瓣总RNA提取结果 | 第34-35页 |
| ·桂花Actin基因和DAD-1同源基因的克隆结果与分析 | 第35-42页 |
| ·RT-PCR产物 | 第35-36页 |
| ·Actin基因RT-PCR产物 | 第35页 |
| ·DAD-1同源基因RT-PCR产物 | 第35-36页 |
| ·克隆片段的回收、转化及鉴定 | 第36-37页 |
| ·Actin基因片段的回收、转化及鉴定 | 第36-37页 |
| ·DAD-1基因片段的回收、转化及鉴定 | 第37页 |
| ·序列测定结果及分析 | 第37-42页 |
| ·Actin基因序列分析 | 第37-39页 |
| ·DAD-1序列分析 | 第39-42页 |
| ·DAD-1在不同时期花瓣中的表达差异检测 | 第42-43页 |
| 4.结论与讨论 | 第43-48页 |
| ·桂花花瓣总RNA的提取 | 第43页 |
| ·PCR体系和程序 | 第43-44页 |
| ·桂花Actin基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·桂花DAD-1同源基因片段的克隆 | 第45-46页 |
| ·桂花DAD-1基因同源片段的获得 | 第45页 |
| ·不同植物DAD-1基因的亲缘关系比较 | 第45-46页 |
| ·不同时期花瓣DAD-1基因的表达分析 | 第46页 |
| ·本实验存在的不足与今后研究展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 附录1.常用缓冲液、溶液及培养基的配制 | 第55页 |
| 附录2.RNA酶活性的灭除方法 | 第55-56页 |
| 附录3.基因信息 | 第56-57页 |
| 附录4.pMD18-T载体信息 | 第57页 |