人胚胎干细胞系向视网膜色素上皮细胞分化差异的研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-24页 |
| ·引言 | 第11页 |
| ·胚胎干细胞系间差异 | 第11-15页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·基因组上的差异 | 第12页 |
| ·表观遗传上的差异 | 第12-13页 |
| ·表达谱上的差异 | 第13-14页 |
| ·发育潜能和分化倾向性上的差异 | 第14页 |
| ·免疫上的差异 | 第14-15页 |
| ·RPE的相关介绍 | 第15-17页 |
| ·RPE的发育过程 | 第15页 |
| ·RPE的功能 | 第15-16页 |
| ·RPE相关疾病 | 第16-17页 |
| ·RPE的细胞系 | 第17页 |
| ·RPE的分化 | 第17-20页 |
| ·自发分化 | 第17-18页 |
| ·诱导分化 | 第18-19页 |
| ·逆分化与转分化 | 第19-20页 |
| ·miRNA与RPE的研究 | 第20-21页 |
| ·miRNA与RPE | 第20-21页 |
| ·miRNA与分化 | 第21页 |
| ·RPE细胞替代治疗 | 第21-22页 |
| ·本课题研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料 | 第24-28页 |
| ·细胞及小鼠来源 | 第24页 |
| ·设备 | 第24-25页 |
| ·试剂耗材 | 第25-26页 |
| ·引物序列 | 第26-27页 |
| ·质粒信息 | 第27-28页 |
| 第三章 实验方法 | 第28-40页 |
| ·饲养层细胞的制作 | 第28-30页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的获取 | 第28-29页 |
| ·胎鼠成纤维细胞的传代 | 第29页 |
| ·丝裂霉素处理和冻存 | 第29-30页 |
| ·人胚胎干细胞的培养 | 第30-31页 |
| ·复苏饲养层细胞 | 第30页 |
| ·人胚胎干细胞的传代培养 | 第30-31页 |
| ·诱导分化方法 | 第31-33页 |
| ·方法一：添加Dkk-1和Lefty-A诱导 | 第31-32页 |
| ·方法二：添加NIC诱导 | 第32-33页 |
| ·分化方案三：在Matrigel上自发分化 | 第33页 |
| ·RPE免疫荧光鉴定 | 第33-34页 |
| ·RPE特异性标记基因表达量检测 | 第34-36页 |
| ·293T细胞传代培养 | 第36页 |
| ·慢病毒制备 | 第36-38页 |
| ·提取质粒 | 第36-37页 |
| ·包装病毒 | 第37-38页 |
| ·病毒浓缩 | 第38页 |
| ·病毒滴度检测 | 第38页 |
| ·慢病毒感染 | 第38-40页 |
| ·慢病毒感染hESCs | 第38-39页 |
| ·慢病毒感染RPE | 第39-40页 |
| 第四章 结果与分析 | 第40-57页 |
| ·hESCs的诱导分化 | 第40-47页 |
| ·hESCs的形态观察 | 第40-41页 |
| ·hESCs的干性鉴定 | 第41-42页 |
| ·诱导分化 | 第42-43页 |
| ·色素团出现 | 第43-44页 |
| ·RPE的扩大培养 | 第44-46页 |
| ·长期培养观察 | 第46-47页 |
| ·分化时间和效率 | 第47页 |
| ·免疫荧光染色, | 第47-48页 |
| ·Q-PCR检测 | 第48-50页 |
| ·RPE的逆分化特性 | 第50-51页 |
| ·慢病毒过表达miR-204/211 | 第51-57页 |
| ·病毒包装 | 第51-52页 |
| ·病毒滴度测定 | 第52-53页 |
| ·慢病毒感染hESCs | 第53-55页 |
| ·慢病毒感染逆分化的RPE | 第55-57页 |
| 第五章 讨论 | 第57-61页 |
| ·实验相关问题 | 第57页 |
| ·Y-27632的作用 | 第57-58页 |
| ·miR-204/211的作用 | 第58页 |
| ·外源基因的导入方法 | 第58-59页 |
| ·RPE的分离纯化 | 第59页 |
| ·替代细胞疗法的细胞来源问题 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第67页 |
