| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-21页 |
| ·昆虫病原真菌的侵染过程及相应分子对策 | 第10-15页 |
| ·体表附着阶段 | 第10-11页 |
| ·体壁穿透阶段 | 第11-14页 |
| ·附着胞的形成 | 第11-12页 |
| ·分解寄主外壳的水解酶 | 第12-14页 |
| ·蛋白质降解酶 | 第12-13页 |
| ·几丁质酶 | 第13-14页 |
| ·体内定殖阶段 | 第14-15页 |
| ·免疫抵抗反应 | 第14页 |
| ·分泌毒素 | 第14-15页 |
| ·体内生长 | 第15页 |
| ·昆虫病原真菌的遗传转化方法 | 第15-19页 |
| ·PEG/原生质体转化法 | 第15-16页 |
| ·醋酸锂转化法 | 第16页 |
| ·电击转化法 | 第16-17页 |
| ·基因枪转化法 | 第17页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第17-19页 |
| ·昆虫病原真菌的研究应用前景 | 第19-20页 |
| ·虫生真菌毒力基因工程的研究 | 第19-20页 |
| ·虫生真菌制剂的研究 | 第20页 |
| ·总结与展望 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-23页 |
| ·研究的目的意义 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21页 |
| ·研究内容的创新之处 | 第21-23页 |
| 3 材料与方法 | 第23-41页 |
| ·材料 | 第23-27页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| ·质粒载体 | 第23页 |
| ·主要的培养基 | 第23-24页 |
| ·主要的化学试剂 | 第24页 |
| ·常用的缓冲液和贮藏液 | 第24-26页 |
| ·主要的仪器设备 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-41页 |
| ·pGPS3Ben-Pr1A载体的构建 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·质粒抽提 | 第28页 |
| ·目标片段扩增 | 第28-29页 |
| ·酶切及纯化 | 第29页 |
| ·去磷酸化与连接 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR验证 | 第31页 |
| ·酶切验证 | 第31页 |
| ·球孢白僵菌对草胺磷的敏感性测定 | 第31-32页 |
| ·球孢白僵菌对苯菌灵的敏感性测定 | 第32页 |
| ·芽生孢子法转化Bb13 | 第32-33页 |
| ·芽生孢子的制备 | 第32-33页 |
| ·芽生孢子的转化 | 第33页 |
| ·原生质体法转化Bb202 | 第33-34页 |
| ·球孢白僵菌基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·真菌转化子的PCR初步筛选与验证 | 第35-36页 |
| ·真菌转化子的继代培养 | 第36页 |
| ·真菌转化子的RT-PCR验证 | 第36-37页 |
| ·真菌基因组RNA的提取与检测 | 第36页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第36-37页 |
| ·以cDNA为模板的PCR验证 | 第37页 |
| ·PR1A的酶活测定 | 第37-38页 |
| ·Western blot检测 | 第38-39页 |
| ·蛋白样品制备 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE | 第38页 |
| ·Western blot | 第38-39页 |
| ·生物测定 | 第39-40页 |
| ·菌种与菌剂 | 第39页 |
| ·供试昆虫 | 第39-40页 |
| ·处理方法 | 第40页 |
| ·毒力测定的数据处理 | 第40页 |
| ·PR1A对AAIT降解的定性分析 | 第40-41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-66页 |
| ·pGPS3Ben-Pr1A载体的验证 | 第41-43页 |
| ·目标片段扩增结果 | 第41-42页 |
| ·菌液PCR验证 | 第42页 |
| ·酶切验证 | 第42-43页 |
| ·球孢白僵菌抗药性的测定 | 第43-45页 |
| ·球孢白僵菌对草胺磷的敏感性测定结果 | 第43-44页 |
| ·球孢白僵菌对苯菌灵的敏感性测定结果 | 第44-45页 |
| ·一价工程菌株的筛选及验证 | 第45-48页 |
| ·一价工程菌株Bb202T第一代转化子的检测与验证 | 第45页 |
| ·一价工程菌株Bb202T-7继代培养五代后PCR验证 | 第45-46页 |
| ·一价工程菌株Bb13T第一代转化子的验证及初步毒力测定 | 第46-48页 |
| ·一价工程菌株Bb13T继代培养五代后PCR验证及初步毒力测定 | 第48页 |
| ·二价工程菌株的筛选及验证 | 第48-51页 |
| ·二价工程菌株Bb13TPr1A第一代转化子的验证 | 第48-49页 |
| ·二价工程菌株Bb13TPr1A继代培养五代后PCR验证 | 第49-50页 |
| ·二价工程菌株的PR1A酶活测定 | 第50-51页 |
| ·工程菌株的RT-PCR验证 | 第51-53页 |
| ·工程菌株的Western blot检测 | 第53-58页 |
| ·AAIT的Western blot检测 | 第53-54页 |
| ·PR1A的Western blot检测 | 第54-58页 |
| ·毒力的生物测定 | 第58-63页 |
| ·致死中时间的生物测定 | 第58-62页 |
| ·致死中浓度的生物测定 | 第62-63页 |
| ·PR1A对AAIT的降解作用 | 第63-66页 |
| ·定性检测PR1A对AAIT的降解作用 | 第63-64页 |
| ·Western blot检测PR1A对AAIT的降解作用 | 第64-66页 |
| 5 讨论 | 第66-69页 |
| ·关于质粒载体构建 | 第66页 |
| ·遗传转化方法的研究 | 第66-67页 |
| ·二价工程菌株的构建 | 第67页 |
| ·PR1A对AAIT的降解作用 | 第67-68页 |
| ·基因工程重组菌株的安全性问题及解决方案 | 第68-69页 |
| 6 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |
| 在读期间投稿和发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 附图 | 第78页 |
