| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-40页 |
| ·生物固氮的概念和意义 | 第11-23页 |
| ·豆科植物根瘤的形成过程 | 第12-14页 |
| ·根瘤菌中参与结瘤的基因 | 第14-15页 |
| ·结瘤因子 | 第15-16页 |
| ·豆科植物中的结瘤因子信号转导途径 | 第16-23页 |
| ·植物中的受体蛋白激酶 | 第23-25页 |
| ·ARID蛋白家族 | 第25-30页 |
| ·ARID蛋白家族的分类 | 第25-27页 |
| ·ARID结构域的结构 | 第27-28页 |
| ·ARID家族蛋白的生物学功能 | 第28-30页 |
| ·蛋白质相互作用研究方法及其应用 | 第30-39页 |
| ·酵母双杂交系统(Yeast two bybrid system,Y2H) | 第31-32页 |
| ·酵母双杂交系统局限性和存在的问題 | 第32-33页 |
| ·噬菌体展示技术(Phage display techniques,PDT) | 第33-34页 |
| ·串联亲和纯化(Tandem Affinity Purification,TAP) | 第34-35页 |
| ·荧光共振能量转移 | 第35页 |
| ·表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR) | 第35-36页 |
| ·化学交联法(chemical cross-linking) | 第36页 |
| ·免疫共沉淀(coimmunoprecipitation) | 第36-37页 |
| ·融合蛋白亲和色谱法(Protein fusion affinity chromatography) | 第37页 |
| ·原子作用力显微技术(Atomic Force Microscopy,AFM) | 第37-38页 |
| ·全基因组计算分析法 | 第38页 |
| ·构建相互作用模型法(Integrate networks and models) | 第38页 |
| ·蛋白质芯片(Protein microarray) | 第38-39页 |
| ·微量热技术(Microcalorimetry) | 第39页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 2 实验材料与方法 | 第40-60页 |
| ·材料 | 第40-45页 |
| ·菌株和质粒 | 第40-41页 |
| ·培养基 | 第41-42页 |
| ·缓冲液和反应试剂 | 第42-45页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-60页 |
| ·基本分子生物学操作方法 | 第45页 |
| ·植物材料的准备 | 第45-47页 |
| ·总RNA的制备 | 第47页 |
| ·RT-PCR反应 | 第47-48页 |
| ·Real-TimePCR反应 | 第48-49页 |
| ·已知基因的克隆 | 第49页 |
| ·百脉根AD-cDNA文库的构建 | 第49-51页 |
| ·GAIABD-SymRK诱饵质粒的构建及检测 | 第51-53页 |
| ·百脉根Y2H-AD-cDNA文库的筛选 | 第53-55页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第55页 |
| ·蛋白质纯化抗体制备 | 第55-58页 |
| ·Western Bloting | 第58页 |
| ·DNA-蛋白质体相互作用外结合试验 | 第58-59页 |
| ·蛋白激酶的自磷酸化和底物磷酸化检测 | 第59页 |
| ·异源蛋白在洋葱表皮细胞中的瞬间表达 | 第59页 |
| ·分析软件及生物信息学网站 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-86页 |
| ·已知基因之间的相互作用的验证 | 第60-61页 |
| ·百脉根Y2H-cDNA文库的构建 | 第61-63页 |
| ·百脉根总RNA和cDNA的质量检测 | 第61页 |
| ·百脉根AD-cDNA文库库效率的鉴定 | 第61-63页 |
| ·SymRK蛋白相互作用靶基因的筛选 | 第63-66页 |
| ·SIP1基因的相关研究 | 第66-80页 |
| ·SIP1基因的结构 | 第66-70页 |
| ·SIP1蛋白与SymRK-PK蛋白的相互作用 | 第70-72页 |
| ·SIP1蛋白能形成同源二聚体 | 第72-73页 |
| ·SIP1蛋白具有结合DNA的活性 | 第73-74页 |
| ·SIP1蛋白没有转录激活活性 | 第74-75页 |
| ·SIP1蛋白可以结合NIN-promotor | 第75-77页 |
| ·SIP1和NIN基因在百脉根中的表达 | 第77-79页 |
| ·SIP1蛋白的亚细胞定位 | 第79-80页 |
| ·SIP1蛋白不是SymRK-PK蛋白的磷酸化底物 | 第80页 |
| ·SIP2基因的相关研究 | 第80-84页 |
| ·SIP2蛋白的结构分析 | 第80-82页 |
| ·SIP2蛋白的磷酸化位点分析 | 第82-83页 |
| ·利用酵母双杂交系统验证SIP1/SIP2/SymRK蛋白之间的相互作用 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-86页 |
| 4 讨论与展望 | 第86-91页 |
| ·讨论 | 第86-90页 |
| ·SymRK、SIP1、NIN三者之间的关系及其它 | 第86-87页 |
| ·SymRK在结瘤因子信号转导中的作用及其它 | 第87-90页 |
| ·展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-102页 |
| 附录一:不同的结瘤因子的结构 | 第102-107页 |
| 附录二:本研究所用引物 | 第107-110页 |
| 附录三:SIP1的cDNA和蛋白质序列 | 第110-112页 |
| 附录四:已发表的论文 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
