| 前言 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 一 文献综述 | 第12-31页 |
| 1 植物衰老现象和研究植物衰老的意义 | 第12-13页 |
| 2 衰老的研究概况 | 第13-19页 |
| ·叶片衰老的启动 | 第13-16页 |
| ·环境因素的影响 | 第13-14页 |
| ·自主因子的调节 | 第14-16页 |
| ·叶片衰老相关基因的变化 | 第16-19页 |
| ·第一类衰老下调基因 | 第18页 |
| ·第二类衰老相关基因 | 第18-19页 |
| ·第三类衰老特异基因 | 第19页 |
| 3 衰老的调控研究 | 第19-27页 |
| ·体外处理对衰老调控的研究 | 第22-23页 |
| ·激素与植物生长调节剂的调控 | 第22-23页 |
| ·栽培条件优化调控 | 第23页 |
| ·活性氧清除剂调的调控 | 第23页 |
| ·分子遗传调控 | 第23-27页 |
| ·利用外源IPT基因对衰老的调控研究 | 第24-26页 |
| ·阻止乙烯形成基因的表达对衰老调控的研究 | 第26-27页 |
| 4 反义RNA技术的应用 | 第27-30页 |
| ·反义RNA的技术的作用机制 | 第27-28页 |
| ·反义RNA的获得 | 第28-29页 |
| ·利用诱导剂诱导合成 | 第28页 |
| ·采用重组DNA技术构建反义表达载体 | 第28页 |
| ·利用Qβ复制酶技术扩增 | 第28-29页 |
| ·体外化学合成 | 第29页 |
| ·反义RNA技术的特点 | 第29页 |
| ·特异性强 | 第29页 |
| ·操作简便 | 第29页 |
| ·安全性好 | 第29页 |
| ·反义 RNA技术的应用 | 第29-30页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| ·水稻两优培九早衰的研究现状 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第31页 |
| 二 材料与方法 | 第31-42页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·供试材料 | 第31页 |
| ·菌株与质粒 | 第31页 |
| ·酶与试剂 | 第31-32页 |
| ·PCR引物 | 第32页 |
| ·PS-T | 第32页 |
| ·溶液和培养基 | 第32-33页 |
| 2实验方法 | 第33-42页 |
| ·SAG_(12)cDNA片段的克隆 | 第33-37页 |
| ·两优培九水稻叶片总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·总RNA的反转录 | 第34页 |
| ·PCR引物的合成 | 第34页 |
| ·PCR反应 | 第34-35页 |
| ·SAG_(12)cDNA的胶回收 | 第35页 |
| ·SAG_(12)cDNA与T载体的连接 | 第35页 |
| ·重组质粒SAG_(12)-T的转化 | 第35-36页 |
| ·转化子质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·序列测定及分析 | 第37页 |
| ·反义SAG_(12)的PCR | 第37页 |
| ·反义SAG_(12)植物表达中间载体的构建与鉴定 | 第37-39页 |
| ·P_(SAG12)的PCR | 第39页 |
| ·反义SAG_(12)植物衰老特异性表达载体的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·反义表达载体P_(SAG12)-anti-SAG_(12)农杆菌的转化与转化子的鉴定 | 第40页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第40页 |
| ·冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第40页 |
| ·转化子的鉴定 | 第40页 |
| ·农杆菌介导转化水稻愈伤组织及其分化 | 第40-42页 |
| ·水稻两优培九胚性愈伤组织的诱导 | 第41页 |
| ·水稻愈伤组织的转化 | 第41-42页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第42页 |
| ·抗性愈伤组织分化 | 第42页 |
| ·生根和壮苗 | 第42页 |
| 三 结果与分析 | 第42-50页 |
| 1 稻衰老叶片总RNA的提取与检测 | 第42页 |
| 2 SAG_(12)基因片段克隆与鉴定 | 第42-44页 |
| 3 SAG_(12)片段分析 | 第44页 |
| 4 反义SAG_(12)植物表达中间载体的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| 5 反义表达载体P_(SAG12)-anti-SAG_(12)的构建与鉴定 | 第45-47页 |
| 6 农杆菌的转化与转化子的鉴定 | 第47页 |
| 7 农杆菌介导转化水稻愈伤组织 | 第47-48页 |
| 8 抗性愈伤组织的筛选 | 第48页 |
| 9 抗性愈伤组织的再生与分化 | 第48-50页 |
| 四 讨论 | 第50-53页 |
| 1 衰老叶片总RNA的提取 | 第50页 |
| 2 水稻叶片衰老过程中特异基因的表达 | 第50-51页 |
| 3 SAG_(12)启动子结构与应用 | 第51-52页 |
| 4 影响水稻愈伤组织筛选的因素 | 第52页 |
| 5 后继工作 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录一 培养基配方 | 第60-63页 |
| 一、NB培养基 | 第60-61页 |
| 二、AAM培养基配方 | 第61-62页 |
| 三、LB配方 | 第62页 |
| 四、YEB配方 | 第62-63页 |
| 附录二 实验溶液配制 | 第63-64页 |
| 附录三 SAG_(12)cDNA片段公布在GenBank上 | 第64-66页 |
| 附录四 SAG_(12)基因测序报告 | 第66-67页 |
| 附录五 同源序列比对结果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
