嗜热栖热菌（Thermus thermophilus）α-葡萄糖苷酶基因的克隆、表达及酶学性质分析
| 第一章 综述 | 第1-26页 |
| ·引言 | 第12页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的研究现状及进展 | 第12-20页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第12-16页 |
| ·α-葡萄糖苷酶检测方法 | 第16-17页 |
| ·α-葡萄糖苷酶在细胞中的分布 | 第17页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的化学构成与结构 | 第17-19页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第19-20页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的生物学功能 | 第20页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的来源 | 第20页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的应用及其前景展望 | 第20-24页 |
| ·生产低聚异麦芽糖 | 第20-23页 |
| ·在啤酒酿造中的应用 | 第23-24页 |
| ·其他方面的应用 | 第24页 |
| ·本课题的立题背景、意义与主要内容 | 第24-26页 |
| ·立题背景与意义 | 第24-25页 |
| ·主要研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 α-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达 | 第26-40页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·材料 | 第26-28页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·主要化学试剂与酶 | 第26-27页 |
| ·实验仪器设备 | 第27页 |
| ·主要溶剂及其配制 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-37页 |
| ·嗜热栖热菌HB27生长曲线的测定 | 第28页 |
| ·嗜热栖热菌总DNA的提取 | 第28-30页 |
| ·DNA纯度测定 | 第30-31页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的基因hbg的PCR扩增 | 第31-33页 |
| ·克隆载体pET-hbg的构建 | 第33-35页 |
| ·重组质粒的筛选及鉴定 | 第35-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-39页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第37页 |
| ·基因组DNA的纯度 | 第37-38页 |
| ·PCR反应结果 | 第38页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第三章 α-葡萄糖苷酶的纯化 | 第40-52页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料 | 第40-42页 |
| ·实验仪器设备 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·亲和层析溶液 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-50页 |
| ·目的蛋白的分离纯化流程图 | 第42页 |
| ·菌体细胞的培养 | 第42页 |
| ·粗酶液的获得 | 第42-43页 |
| ·亲和柱层析 | 第43-44页 |
| ·透析 | 第44页 |
| ·酶液浓缩 | 第44页 |
| ·DEAE-Sepharose离子交换 | 第44-46页 |
| ·Superdex~(TM)200凝胶过滤 | 第46-47页 |
| ·α-葡萄糖苷酶活力测定方法 | 第47-48页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE) | 第48-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-51页 |
| ·酶活性标准曲线 | 第50页 |
| ·酶纯化回收情况 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第四章 α-葡萄糖苷酶酶学性质研究 | 第52-62页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-55页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第53页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的最适pH测定 | 第53-54页 |
| ·α-葡萄糖苷酶最适温度测定 | 第54页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的pH稳定性测定 | 第54页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的热稳定性测定 | 第54页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的底物特异性 | 第54页 |
| ·金属离子对α-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·蛋白变性剂对α-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第55页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的K_m和V_(max)的测定 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-60页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的最适pH | 第55-56页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的最适温度 | 第56页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的pH稳定性 | 第56-57页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第57页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的底物特异性 | 第57页 |
| ·金属离子对α-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第57-58页 |
| ·蛋白变性剂对α-葡萄糖苷酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·α-葡萄糖苷酶的K_m和V_(max) | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第62页 |
| ·进一步研究的建议 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第70页 |
