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农杆菌介导花生白藜芦醇合酶基因转化马铃薯研究

摘要第1-3页
Abstract第3-4页
中文文摘第4-11页
序言第11-20页
第1章 花生白藜芦醇合酶基因表达载体构建第20-37页
   ·材料与方法第21-31页
     ·材料第21-23页
       ·菌种、质粒、引物第21-23页
       ·主要药品和生化试剂第23页
       ·培养基第23页
       ·质粒提取液和电泳缓冲液第23页
       ·主要仪器第23页
     ·方法第23-31页
       ·菌株pCAMBIA1301和pUCRSH1活化与质粒提取第23-24页
       ·植物双元表达载体pB3RS构建技术路线第24-25页
       ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切检测第25-26页
       ·质粒pUCRSH1酶切第26页
       ·质粒pCAMBIA1301酶切、补平第26-27页
       ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切片段纯化第27-28页
       ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切纯化片段连接第28-29页
       ·E.coli DH5 α感受态细胞制备第29页
       ·重组质粒pB3RS转化大肠杆菌第29-30页
       ·转化菌株PCR检测和酶切检测第30-31页
       ·菌株保存第31页
   ·结果与分析第31-35页
     ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切检测第31-32页
     ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切片段纯化第32-33页
     ·质粒pCAMBIA1301与pUCRSH1酶切片段纯化后电泳第33页
     ·重组质粒pB3RS检测第33-35页
   ·小结和讨论第35-37页
第2章 重组质粒pB3RS转化农杆菌第37-45页
   ·材料与方法第37-41页
     ·材料第37-38页
       ·菌种、质粒、引物第37-38页
       ·主要药品和生化试剂第38页
       ·培养基第38页
       ·提取液和电泳缓冲液第38页
       ·主要仪器第38页
     ·方法第38-41页
       ·农杆菌LBA4404感受态细胞制备第38-39页
       ·重组质粒pB3RS转化农杆菌第39页
       ·转化菌株重组质粒pB3RS提取第39-40页
       ·重组质粒pB3RS PCR检测第40-41页
       ·重组质粒pB3RS酶切检测第41页
       ·工程菌株保存第41页
   ·结果与分析第41-43页
   ·小结和讨论第43-45页
第3章 马铃薯转基因受体系统建立第45-52页
   ·材料与方法第46-49页
     ·材料第46-47页
       ·植物材料第46页
       ·主要试剂第46页
       ·培养基母液和生长调节剂母液第46-47页
     ·方法第47-49页
       ·不同生长调节剂组合对愈伤组织诱导和器官再生的影响第47-49页
         ·培养基配制第47-48页
         ·外植体分离与接种第48-49页
       ·潮霉素选择压测定第49页
   ·结果与分析第49-51页
     ·不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导和器官再生的影响第49-51页
     ·潮霉素对不定芽分化的影响第51页
   ·小结和讨论第51-52页
第4章 农杆菌转化程序优化及马铃薯遗传转化第52-58页
   ·材料与方法第52-55页
     ·材料第52-53页
       ·生物材料第52页
       ·主要生化药品第52-53页
       ·培养基第53页
       ·主要仪器第53页
     ·方法第53-55页
       ·转化程序优化第53-55页
         ·外植体准备第54页
         ·工程菌液制备第54页
         ·菌液浸泡第54页
         ·共培养第54-55页
         ·选择培养第55页
         ·继代选择培养第55页
       ·马铃薯遗传转化第55页
   ·结果与分析第55-57页
     ·根癌农杆菌转化程序优化第55-56页
     ·马铃薯转化株获得第56-57页
   ·小结与分析第57-58页
第五章 抗性无性系的PCR检测和Southern杂交鉴定第58-69页
   ·材料与方法第58-64页
     ·材料第58-59页
       ·无性系和质粒第58页
       ·主要生化试剂和试剂盒第58页
       ·主要化学试剂第58-59页
       ·主要仪器第59页
     ·方法第59-64页
       ·植物总DNA提取第59-60页
       ·植物总DNA PCR检测第60页
       ·地高辛标记探针制备第60-61页
         ·RS基因片段PCR扩增第60-61页
         ·扩增片段纯化第61页
         ·探针标记第61页
       ·植物总DNA限制性酶切第61-62页
       ·限制性酶切片段琼脂糖凝胶分离第62页
       ·印迹第62-63页
         ·凝胶处理第62页
         ·印迹第62-63页
       ·杂交第63页
       ·洗膜第63页
       ·免疫检验第63-64页
         ·试剂配制第63页
         ·呈色反应第63-64页
   ·结果与分析第64-67页
     ·抗性无性系总DNA PCR检测第64-65页
     ·重组质粒pB3RS PCR扩增产物纯化与浓缩第65-66页
     ·马铃薯总DNA酶切效果第66页
     ·Southern杂交鉴定第66-67页
   ·小结与讨论第67-69页
结论第69-70页
附录 符号缩略表第70-71页
参考文献第71-76页
致谢第76-77页
福建师范大学学位论文使用授权声明第77页

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