| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-36页 |
| 1 类固醇化合物 | 第14-16页 |
| ·甾体的结构与取代特征 | 第14页 |
| ·甾醇的种类 | 第14-15页 |
| ·生物体内类固醇的转运 | 第15页 |
| ·类固醇激素的作用 | 第15页 |
| ·类固醇含量的检测 | 第15-16页 |
| 2 类固醇化合物的微生物降解 | 第16-17页 |
| ·微生物对甾体转化的反应类型和他的反应机理 | 第16-17页 |
| ·羟化反应机理 | 第16页 |
| ·脱氢反应机理 | 第16-17页 |
| ·微生物对甾醇侧链的降解 | 第17页 |
| ·微生物对甾体母核的降解 | 第17页 |
| 3 睾丸酮丛毛单胞菌研究进展 | 第17-26页 |
| ·睾丸酮丛单胞毛菌 | 第17-18页 |
| ·类固醇底物对睾丸酮丛毛单胞菌酶的诱导表达 | 第18-20页 |
| ·TIP1 | 第19页 |
| ·TIP4 | 第19页 |
| ·TIP8 | 第19-20页 |
| ·TIP11 | 第20页 |
| ·其它一些酶 | 第20页 |
| ·羟类固醇脱氢酶(HSDs)的特性 | 第20-23页 |
| ·3α-HSDs介导的反应 | 第20-21页 |
| ·C testosteroni的3α-HSD／CR是SDR家族的新成员 | 第21-22页 |
| ·C testosteroni的3α-HSD／CR的三维结构 | 第22-23页 |
| ·C. testosteroni 3α-HSD／CR基因附近的基因组成 | 第23-24页 |
| ·类固醇对Comamonas testosteroni ATCC119963 3α-HSD／CR基因的表达调控 | 第24-26页 |
| ·操纵基因 | 第24-25页 |
| ·抑制子RepA | 第25页 |
| ·抑制子RepB | 第25-26页 |
| 4 基因的表达调控 | 第26-32页 |
| ·转录水平的调控 | 第26-32页 |
| ·DNA结合蛋白 | 第26-27页 |
| ·操纵子的转录调控 | 第27-31页 |
| ·启动子 | 第28-29页 |
| ·增强子 | 第29-30页 |
| ·负控诱导系统 | 第30页 |
| ·负控阻遏系统 | 第30页 |
| ·正控诱导系统 | 第30-31页 |
| ·细菌的应急反应 | 第31页 |
| ·通过σ因子更换的调控 | 第31页 |
| ·信号传导和二组分调节系统 | 第31页 |
| ·多启动子调控的操纵子 | 第31-32页 |
| ·转录后调控 | 第32页 |
| 5.工程菌改造策略 | 第32-34页 |
| ·原生质体融合技术 | 第32页 |
| ·基因重组技术 | 第32-34页 |
| ·质粒转移构建多质粒菌株 | 第33页 |
| ·利用质粒突变筛选高效降解工程菌 | 第33页 |
| ·DNA改组技术 | 第33-34页 |
| 6 存在问题和本研究的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 3A-HSD／CR、ACTIVATOR基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第36-64页 |
| 1 材料和方法 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌种和质粒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·酶、生化试剂及试剂盒 | 第36-37页 |
| ·ELISA | 第37页 |
| ·方法 | 第37-46页 |
| ·细菌培养 | 第37页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-43页 |
| ·3α-HSD／CR表达载体的构建 | 第37-42页 |
| ·Activator表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·质粒pKtacl-act1、pKtacl-act2、pKtacl-act3和pKtacl-act4的构建与检测 | 第43-45页 |
| ·质粒pKtacl-act1和pKtacl-act2的构建 | 第43-44页 |
| ·质粒pKtacl-act3和pKtacl-act4的构建 | 第44页 |
| ·重组质粒的稳定性检测 | 第44页 |
| ·重组质粒的activator表达检测 | 第44-45页 |
| ·重组质粒分别与pAXl一起转化大肠杆菌的3α-HSD／CR和activator检测 | 第45页 |
| ·细菌总蛋白的测定 | 第45页 |
| ·ELISA检测 | 第45-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-61页 |
| ·3α-HSD／CR表达载体的构建(pET-15b-3α) | 第46-48页 |
| ·Activator表达载体的构建 | 第48-50页 |
| ·质粒pKtacl-act1、pKtacl-act2、pKtacl-act3和pKtacl-act4的构建 | 第50-55页 |
| ·质粒pKtacl-act1和pKtacl-act2的构建 | 第50-54页 |
| ·质粒pKtacl-act3和pKtacl-act4的构建 | 第54页 |
| ·质粒pKtacl-act1、pKtacl-act2、pKtacl-act3和pKtacl-act4的启动子区序列分析 | 第54-55页 |
| ·质粒pKtacl-act1、pKtacl-act2、pKtacl-act3和pKtacl-act4的检测 | 第55-61页 |
| ·稳定性检测 | 第55-57页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌的的activator表达检测 | 第57-58页 |
| ·重组质粒分别与pAXl一起转化大肠杆菌的3α-HSD／CR和activator检测 | 第58-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| ·表达载体的作用 | 第61页 |
| ·activator的作用 | 第61-62页 |
| ·细菌的防御机制与重组质粒的稳定性 | 第62页 |
| ·抗体的特异性 | 第62-64页 |
| 第三章 基因工程菌的构建 | 第64-85页 |
| 1 材料和方法 | 第64-69页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·方法 | 第65-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-81页 |
| ·利用PCR筛选基因工程菌 | 第69-70页 |
| ·基因工程菌的Southern检测 | 第70-71页 |
| ·睾丸酮对细菌的诱导 | 第71页 |
| ·工程菌稳定性的检测 | 第71-78页 |
| ·不添加抗生素进行连续传代培养的3α-HSD／CR检测 | 第72-73页 |
| ·不添加抗生素进行连续继代培养的activator检测 | 第73-74页 |
| ·添加抗生素进行连续继代培养的3α-HSD／CR检测 | 第74-75页 |
| ·添加抗生素进行连续继代培养的activator检测 | 第75-76页 |
| ·Activator对3α-HSD／CR表达的影响 | 第76-78页 |
| ·RT-PCR检测 | 第78-80页 |
| ·双向电泳的结果 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-85页 |
| 小结 | 第85-88页 |
| 1 主要结论 | 第85-86页 |
| 2 本研究的主要创新点 | 第86-87页 |
| 3 进一步研究展望 | 第87页 |
| 4 已发表相关论文 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-104页 |
| 附录Ⅰ 类固醇的生物转化、合成简图 | 第104-105页 |
| 附录Ⅱ RNA聚合酶及其与启动子的相互作用 | 第105-106页 |
| 附录Ⅲ 缓冲液等的配制 | 第106-109页 |
| 附录Ⅳ 缩写词和英汉对照 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
