| 内容提要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 目录 | 第6-5页 |
| 序言 | 第5-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-32页 |
| 1 简介 | 第9页 |
| 2 蛋白质的稳定性 | 第9-12页 |
| ·酶热稳定性的定义 | 第10页 |
| ·热稳定性酶的优点 | 第10-11页 |
| ·热稳定性酶在工业上的应用 | 第11-12页 |
| 3 酶的热失活 | 第12-13页 |
| 4.影响蛋白质热稳定性的分子因素 | 第13-20页 |
| ·氢键 | 第14-15页 |
| ·疏水作用 | 第15页 |
| ·包装效率 | 第15-16页 |
| ·盐桥 | 第16页 |
| ·降低构象张力 | 第16-17页 |
| ·降低去折叠熵值 | 第17-19页 |
| ·稳定α—螺旋 | 第19-20页 |
| ·稳定环肽链结构 | 第20页 |
| 5.提高蛋白质热稳定性的策略 | 第20-32页 |
| ·环境选择法 | 第20-21页 |
| ·蛋白质工程法 | 第21-29页 |
| ·酶固定化法 | 第29-30页 |
| ·酶化学修饰法 | 第30页 |
| ·添加共溶剂法 | 第30-32页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第32-48页 |
| 1.材料 | 第32-35页 |
| 2.实验方法 | 第35-48页 |
| ·PEL-E83V定点突变 | 第35-41页 |
| ·突变基因的获得(重叠延伸PCR法) | 第35-36页 |
| ·突变体克隆载体的构建 | 第36-37页 |
| ·突变体克隆载体的转化及筛选 | 第37页 |
| ·重组质粒DNA的制备 | 第37-38页 |
| ·PEL-E83V基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第38-39页 |
| ·表达产物PEL-E83V-GS的鉴定 | 第39-40页 |
| ·发酵上清脂肪酶酶活的测定 | 第40-41页 |
| ·表达蛋白PEL-E83V-GS最适反应温度和热稳定性的研究 | 第41页 |
| ·PEL-T88P定点突变 | 第41-42页 |
| ·PEL-E214P定点突变 | 第42-44页 |
| ·PEL-K226R和PEL-E54P定点突变 | 第44-45页 |
| ·PEL的随机突变 | 第45-48页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第48-67页 |
| 1.突变点的选择 | 第48-49页 |
| 2.PEL—E83V定点突变 | 第49-52页 |
| ·突变基因lip-E83V的获得 | 第49-50页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第50-51页 |
| ·PEL-E83V-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第51-52页 |
| 3.PEL-T88P定点突变 | 第52-55页 |
| ·突变基因lip-T88P的获得 | 第52-53页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第53页 |
| ·PEL-T88P-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第53-55页 |
| 4.PEL-E214P定点突变 | 第55-58页 |
| ·突变基因lip-E214P的获得 | 第55-56页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第56页 |
| ·PEL-E214P-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第56-58页 |
| 5.PEL-K226R定点突变 | 第58-60页 |
| ·突变基因lip-K226R的获得 | 第58页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第58-59页 |
| ·PEL-K226R-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第59-60页 |
| 6.PEL-E54P定点突变 | 第60-62页 |
| ·突变基因lip-E54P的获得 | 第60-61页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第61-62页 |
| 7.PEL的随机突变 | 第62-67页 |
| ·易错PCR | 第62页 |
| ·突变体的筛选 | 第62-64页 |
| ·突变体最适作用温度和热稳定性的研究 | 第64-66页 |
| ·突变体核苷酸序列分析 | 第66-67页 |
| 第四部分 小结与讨论 | 第67-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 英文缩略词表 | 第79-80页 |
| 在校期间发表的论文和参加学术会议的论文 | 第80-81页 |
| 中文详细摘要 | 第81-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
