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山羊痘病毒受体的筛选及受体结合蛋白初步研究

摘要第1-6页
Abstract第6-12页
第一章 绪论第12-24页
   ·研究目的和意义第12页
   ·病毒受体的研究进展第12-16页
     ·病毒受体及其生物学特性第12-13页
     ·病毒受体的研究方法第13-15页
     ·重要动物病毒受体的研究进展第15-16页
     ·病毒受体研究展望第16页
   ·噬菌体展示技术及其在动物病毒学中的应用第16-20页
     ·噬菌体展示技术的原理第16-17页
     ·噬菌体展示系统的分类及各自特点第17-18页
     ·噬菌体展示技术在动物病毒学中的应用第18-20页
   ·痘病毒的侵入宿主细胞的机制研究进展第20-24页
     ·痘病毒侵入宿主细胞过程概述第20-21页
     ·痘病毒与宿主细胞的结合第21-22页
     ·胞吞作用和病毒的内化第22-23页
     ·膜融合及穿膜作用第23-24页
第二章 山羊痘病毒的培养、纯化及鉴定第24-33页
   ·试验材料第24-26页
     ·毒株,细胞及主要试剂第24页
     ·试剂的配制第24-26页
     ·主要仪器设备第26页
   ·试验方法第26-29页
     ·细胞的冻存与复苏第26-27页
     ·病毒蚀斑实验第27页
     ·GTPV 的培养第27页
     ·差速离心第27页
     ·蔗糖密度梯度离心第27-28页
     ·ELISA 检测第28页
     ·电镜检测第28-29页
   ·试验结果第29-31页
     ·病毒蚀斑实验第29页
     ·CPE 的观察第29-30页
     ·吸光度检测结果及蛋白浓度曲线第30页
     ·ELISA 检测结果第30-31页
     ·电镜观察结果第31页
   ·讨论第31-33页
第三章 山羊睾丸细胞 cDNA 噬菌体展示文库的构建第33-42页
   ·试验材料第33-34页
     ·实验动物第33页
     ·主要试剂第33页
     ·试剂的配制第33-34页
     ·主要仪器设备第34页
   ·试验方法第34-38页
     ·山羊睾丸细胞的原代培养第34页
     ·总 RNA 的提取及质量鉴定第34页
     ·mRNA 的分离第34-35页
     ·cDNA 的合成第35-36页
     ·cDNA 末端修饰第36-37页
     ·cDNA 片段分级分离第37页
     ·cDNA 与噬菌体载体连接第37页
     ·包装产物滴度测定第37-38页
     ·宿主菌的转化第38页
     ·文库重组率测定及插入片段大小鉴定第38页
   ·试验结果第38-40页
     ·山羊睾丸细胞的原代培养第38-39页
     ·总 RNA 的提取及 mRNA 的分离第39页
     ·噬菌体展示文库的鉴定第39-40页
   ·讨论第40-42页
第四章 山羊痘病毒受体的初步筛选第42-50页
   ·试验材料第42-43页
     ·主要试剂第42页
     ·试剂的配制第42-43页
     ·主要仪器设备第43页
   ·试验方法第43-45页
     ·宿主菌的准备第43页
     ·纯化病毒包被酶标板第43-44页
     ·文库的结合第44页
     ·文库的洗脱与扩增第44页
     ·PCR 鉴定与测序第44-45页
     ·序列分析第45页
   ·试验结果第45-48页
     ·文库筛选结果第45页
     ·PCR 鉴定结果第45-46页
     ·序列分析结果第46-47页
     ·蛋白质结构预测第47-48页
   ·讨论第48-50页
第五章 山羊痘病毒受体结合蛋白初步研究第50-60页
   ·试验材料第50-51页
     ·实验动物第50页
     ·病毒、菌株及载体第50页
     ·主要试剂第50页
     ·主要仪器设备第50-51页
   ·试验方法第51-53页
     ·L1 与 L5 蛋白的生物信息学分析第51页
     ·引物的设计与合成第51页
     ·目的片段的扩增第51页
     ·重组表达载体的构建与鉴定第51-52页
     ·重组质粒的诱导表达与鉴定第52页
     ·重组蛋白的大量表达与纯化第52页
     ·重组蛋白抗血清的制备第52-53页
     ·重组蛋白封闭试验第53页
     ·血清抑制试验第53页
   ·试验结果第53-58页
     ·L1 与 L5 的生物信息学分析结果第53-56页
     ·目的基因的扩增及序列分析第56页
     ·表达载体的构建与鉴定第56页
     ·表达产物的 SDS-PAGE 与 Western blot 分析第56-57页
     ·重组蛋白的纯化第57页
     ·重组蛋白抗血清的制备第57-58页
     ·蛋白封闭试验第58页
     ·血清抑制试验第58页
   ·讨论第58-60页
第六章 全文结论第60-61页
参考文献第61-67页
致谢第67-68页
作者简历第68页

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