| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-51页 |
| 1．1 S-腺苷甲硫氨酸及其合成酶基因(SAM) | 第18-20页 |
| 1．1．1 S-腺苷甲硫氨酸 | 第18页 |
| 1．1．2 SAM合成酶及其基因 | 第18页 |
| 1．1．3 SAM的生化功能 | 第18-19页 |
| 1．1．3．1 转甲基作用 | 第19页 |
| 1．1．3．2 转巯基作用 | 第19页 |
| 1．1．3．3 参与多胺合成 | 第19页 |
| 1．1．4 SAM合成酶基因在植物上的研究 | 第19-20页 |
| 1．1．5 SAM在茶树上咖啡因生物合成调控中的利用 | 第20页 |
| 1．2 茶树咖啡因合成酶基因(TCS) | 第20-21页 |
| 1．3 反义RNA技术 | 第21-28页 |
| 1．3．1 反义技术的操作原理 | 第21-22页 |
| 1．3．2 反义RNA操作的技术要点 | 第22-23页 |
| 1．3．2．1 反义RNA表达载体构建 | 第22-23页 |
| 1．3．2．2 转化及表达 | 第23页 |
| 1．3．3 反义RNA技术在植物研究中的应用 | 第23-28页 |
| 1．3．3．1 反义RNA技术在作物品质改良中的应用 | 第23-24页 |
| 1．3．3．2 反义RNA技术在作物杂交育种中的应用 | 第24-25页 |
| 1．3．3．3 反义RNA技术在园艺植物育种中的应用 | 第25页 |
| 1．3．3．4 反义RNA技术在果蔬采后生理调控的应用 | 第25-26页 |
| 1．3．3．5 反义RNA技术在植物抗病中的应用 | 第26-27页 |
| 1．3．3．6 反义RNA技术在其他植物生理研究中的应用 | 第27-28页 |
| 1．4 植物转基因技术进展 | 第28-35页 |
| 1．4．1 直接基因转化系统 | 第28-31页 |
| 1．4．1．1 基因枪介导基因转化法 | 第29页 |
| 1．4．1．2 脂质体介导基因转化法 | 第29页 |
| 1．4．1．3 PEG介导基因转化法 | 第29-30页 |
| 1．4．1．4 显微注射介导基因转化法 | 第30页 |
| 1．4．1．5 电激介导基因转化法 | 第30页 |
| 1．4．1．6 离子束介导基因转化法 | 第30页 |
| 1．4．1．7 激光微束介导基因转化法 | 第30-31页 |
| 1．4．2 种质转化系统 | 第31页 |
| 1．4．2．1 花粉管通道介导基因转化法 | 第31页 |
| 1．4．2．2 生殖细胞浸泡介导基因转化法 | 第31页 |
| 1．4．3 外源基因转化系统 | 第31-34页 |
| 1．4．3．1 根癌农杆菌 | 第32页 |
| 1．4．3．2 发根农杆菌 | 第32-33页 |
| 1．4．3．3 农杆菌转化的影响因素 | 第33-34页 |
| 1．4．4 茶树基因转化研究现状 | 第34-35页 |
| 1．4．4．1 茶树基因枪遗传转化研究 | 第34页 |
| 1．4．4．2 茶树农杆菌介导基因转化法 | 第34-35页 |
| 1．5 儿茶素研究进展 | 第35页 |
| 1．6 目的和意义 | 第35-36页 |
| 1．7 研究内容和技术路线 | 第36页 |
| 1．8 创新之处 | 第36-40页 |
| 1．9 参考文献 | 第40-51页 |
| 第二章 SAM合成酶基因反义表达载体的构建 | 第51-63页 |
| 2．1 材料和方法 | 第51-56页 |
| 2．1．1 材料 | 第51页 |
| 2．1．1．1 质粒 菌种 材料 | 第51页 |
| 2．1．1．2 酶及主要试剂 | 第51页 |
| 2．1．1．3 引物设计 | 第51页 |
| 2．1．1．4 主要仪器 | 第51页 |
| 2．1．2 方法 | 第51-56页 |
| 2．1．2．1 总RNA提取 | 第52页 |
| 2．1．2．2 cDNA第一链合成 | 第52-53页 |
| 2．1．2．3 RT-PCR反应 | 第53页 |
| 2．1．2．4 SAM合成酶反义基因真核表达载体的构建 | 第53-56页 |
| 2．1．2．5 SAM合成酶反义基因表达载体鉴定 | 第56页 |
| 2．2 结果与分析 | 第56页 |
| 2．2．1 茶树RNA的提取 | 第56页 |
| 2．2．2 RT-PCR目的基因的扩增 | 第56页 |
| 2．2．3 反义基因表达载体的构建和鉴定 | 第56页 |
| 2．3 讨论 | 第56-62页 |
| 2．4 参考文献 | 第62-63页 |
| 第三章 发根农杆菌介导的茶树pCAMBIA1301-SAMS遗传转化 | 第63-79页 |
| 3．1 材料和方法 | 第64-65页 |
| 3．1．1 植物材料 | 第64页 |
| 3．1．2 菌株及转化的质粒 | 第64页 |
| 3．1．3 三亲交配法 | 第64页 |
| 3．1．4 农杆菌的PCR验证 | 第64-65页 |
| 3．1．5 农杆菌活化及转化 | 第65页 |
| 3．1．6 潮霉素抗性筛选 | 第65页 |
| 3．1．7 GUS表达组织化学检验 | 第65页 |
| 3．2 结果与分析 | 第65-66页 |
| 3．2．1 农杆菌的PCR验证 | 第65页 |
| 3．2．2 潮霉素抗性筛选 | 第65页 |
| 3．2．3 不同菌株侵染 | 第65-66页 |
| 3．2．4 不同共培养培养基 | 第66页 |
| 3．2．5 不同预培养 | 第66页 |
| 3．2．6 不同苗龄时间 | 第66页 |
| 3．2．7 不同外植体 | 第66页 |
| 3．2．8 GUS染色结果 | 第66页 |
| 3．3 讨论 | 第66-77页 |
| 3．4 参考文献 | 第77-79页 |
| 第四章 紫外胁迫对SAM和TCS合成酶基因的表达调控 | 第79-83页 |
| 4．1 材料和方法 | 第79-80页 |
| 4．1．1 材料 | 第79页 |
| 4．1．1．1 材料 | 第79页 |
| 4．1．1．2 酶及主要试剂 | 第79页 |
| 4．1．1．3 引物设计 | 第79页 |
| 4．1．1．4 主要仪器 | 第79页 |
| 4．1．2 方法 | 第79-80页 |
| 4．1．2．1 总RNA提取 | 第79页 |
| 4．1．2．2 cDNA第一链合成 | 第79-80页 |
| 4．1．2．3 PCR反应条件和反应程序 | 第80页 |
| 4．1．2．4 琼脂糖电泳分析 | 第80页 |
| 4．2 结果与分析 | 第80页 |
| 4．2．1 总RNA提取 | 第80页 |
| 4．2．2 RT-PCR分析 | 第80页 |
| 4．3 讨论 | 第80-82页 |
| 4．4 参考文献 | 第82-83页 |
| 第五章 紫外胁迫对茶树叶片儿茶素积累的影响 | 第83-94页 |
| 5．1 材料和方法 | 第83-85页 |
| 5．1．1 材料 | 第83-84页 |
| 5．1．2 试验处理 | 第84页 |
| 5．1．2．1 UV-B不同处理时间 | 第84页 |
| 5．1．2．2 UV-B不同光照强度 | 第84页 |
| 5．1．2．3 UV-B基因表达处理 | 第84页 |
| 5．1．3 引物设计 | 第84页 |
| 5．1．4 样品分析 | 第84页 |
| 5．1．5 数据分析 | 第84-85页 |
| 5．1．6 RT-PCR | 第85页 |
| 5．2 结果与分析 | 第85-86页 |
| 5．2．1 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理时间的变化 | 第85页 |
| 5．2．2 茶树叶片儿茶素类含量随UV-B处理强度的变化 | 第85-86页 |
| 5．2．3 RNA提取 | 第86页 |
| 5．2．4 RT-PCR | 第86页 |
| 5．3 讨论 | 第86-92页 |
| 5．4 参考文献 | 第92-94页 |
| 第六章 总结 | 第94-95页 |
| 6．1 SAM反义基因构建及其遗传转化 | 第94页 |
| 6．2 紫外胁迫对咖啡合成中关键酶基因影响 | 第94页 |
| 6．3 紫外胁迫对儿茶素积累影响 | 第94-95页 |
| 附录：缩略词表 | 第95-96页 |
