| 目录 | 第1-2页 |
| 独创性说明 | 第2页 |
| 关于论文使用授权的说明 | 第2-3页 |
| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-15页 |
| ·防御素基因工程研究进展 | 第9-14页 |
| ·防御素简介 | 第9页 |
| ·用低等微生物表达防御素的研究 | 第9-10页 |
| ·用原核微生物表达防御素的研究 | 第9-10页 |
| ·用真核微生物表达防御素的研究 | 第10页 |
| ·防御素基因转化高等植物的研究 | 第10-11页 |
| ·防御素基因转化烟草的研究 | 第10页 |
| ·转基因拟南芥的研究 | 第10-11页 |
| ·转基因土豆的研究 | 第11页 |
| ·其它转基因植物 | 第11页 |
| ·用动物细胞表达防御素的研究 | 第11-12页 |
| ·用COS-7细胞表达防御素的研究 | 第11页 |
| ·人α防御素HNP1转导气管上皮细胞的研究 | 第11-12页 |
| ·转基因蚊子的研究 | 第12页 |
| ·防御素转基因物种小结 | 第12-13页 |
| ·防御素基因工程研究现状与前景 | 第13-14页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 第二章 兔防御素基因的原核表达与蛋白纯化 | 第15-30页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·实验材料 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·酶和主要试剂 | 第15页 |
| ·PCR引物 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·仪器设备 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-25页 |
| ·载体构建中的相关方法 | 第16-18页 |
| ·小量碱法提取质粒 | 第16-17页 |
| ·质粒的酶切 | 第17页 |
| ·酶切片段的去磷酸化 | 第17页 |
| ·目的片段的回收 | 第17页 |
| ·目的片段的连接 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第17页 |
| ·反应物的转化 | 第17-18页 |
| ·PCR初步筛选重组转化子 | 第18页 |
| ·酶切检测重组载体及目的片段的正反连接 | 第18页 |
| ·原核表达载体pTYB_2-NP1，pTYB_(12)-NP1，pET-32a-NP1的构建 | 第18-22页 |
| ·重组质粒转化表达菌株大肠杆菌(E.coli)BL21 | 第22页 |
| ·转基因大肠杆菌(E.coli)BL21阳性克隆的诱导表达 | 第22页 |
| ·转基因大肠杆菌可溶性总蛋白的提取 | 第22页 |
| ·过层析柱纯化目的蛋白 | 第22-23页 |
| ·蛋白透析及浓缩 | 第23页 |
| ·Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第23-25页 |
| ·实验结果与分析 | 第25-28页 |
| ·重组载体pTYB_2-NP1，pTYB_(12)-NP1，pET-32a-NP1的构建 | 第25-28页 |
| ·PCR初步筛选重组转化子实验结果 | 第25-26页 |
| ·酶切检测重组载体及目的片段的正反连接 | 第26-28页 |
| ·Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白实验结果 | 第28页 |
| ·本章小结与讨论 | 第28-30页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第28页 |
| ·目的基因翻译后的修饰 | 第28-29页 |
| ·防御素的空间结构与生物学活性的关系 | 第29-30页 |
| 第三章 防御素基因的真核表达及蛋白纯化研究 | 第30-50页 |
| ·前言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·藻种 | 第30页 |
| ·菌种和质粒 | 第30页 |
| ·酶和试剂 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·PCR引物 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·载体构建中的相关方法 | 第31-32页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第31-32页 |
| ·其它方法: | 第32页 |
| ·防御素小球藻表达载体pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1的构建 | 第32-36页 |
| ·小球藻pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1的构建 | 第32页 |
| ·小球藻表达载体pBinNRpro-HisNP1的构建 | 第32-36页 |
| ·小球藻的电激转化 | 第36页 |
| ·小球藻总DNA提取及PCR检测 | 第36-37页 |
| ·小球藻总DNA的提取(改良CTAB法) | 第36-37页 |
| ·转基因小球藻的PCR检测 | 第37页 |
| ·转基因小球藻Southern点杂交检测 | 第37-39页 |
| ·预杂交 | 第37-38页 |
| ·探针标记 | 第38页 |
| ·杂交和压片 | 第38-39页 |
| ·转基因小球藻可溶性总蛋白的提取 | 第39页 |
| ·转基因小球藻可溶性总蛋白抑菌分析 | 第39页 |
| ·五种不同启动子的活性比较 | 第39页 |
| ·利用亲和层析纯化目的蛋白 | 第39-40页 |
| ·Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第40-41页 |
| ·经层析纯化的目的蛋白活性检测 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-49页 |
| ·小球藻pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·用载体pBinU-Omega-HisNP1、pBinNRⅠ-Omega-HisNP1、pBinNRⅡ-Omega-HisNP1、pBinNRⅠpro-HisNP1、pBinNRⅡpro-HisNP1转化小球藻 | 第44-45页 |
| ·转基因小球藻的PCR检测 | 第45页 |
| ·转基因小球藻的Southern点杂交 | 第45-46页 |
| ·转基因小球藻总蛋白提取液的抑菌分析 | 第46-47页 |
| ·五种不同启动子的活性比较 | 第47-48页 |
| ·Tris-Tricine蛋白电泳检测目的蛋白 | 第48页 |
| ·经层析纯化的目的蛋白活性检测 | 第48-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 个人简介 | 第54-55页 |
| 导师简介 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
