| 目录 | 第1-8页 |
| 主要符号对照表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 第一部分 结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 | 第15-86页 |
| 前言 | 第15-18页 |
| 第一章 Hsp16.3蛋白的表达、纯化与多抗血清的制备 | 第18-30页 |
| 前言 | 第18页 |
| 第一节 实验材料 | 第18-22页 |
| 第二节 实验步骤 | 第22-25页 |
| 一、 Hsp16.3的表达 | 第22页 |
| 二、 Hsp16.3蛋白的纯化 | 第22-24页 |
| 三、 Hsp16.3蛋白浓度的测定 | 第24页 |
| 四、 Hsp16.3多抗血清的制备 | 第24-25页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第25-30页 |
| 一、 Hsp16.3的表达与纯化 | 第25-27页 |
| 二、 蛋白质浓度的测定结果 | 第27-28页 |
| 三、 多克隆抗血清的制备结果 | 第28-30页 |
| 第二章 Hsp16.3突变体G59W的构建极其结构和功能研究 | 第30-52页 |
| 前言 | 第30-32页 |
| 第一节 实验材料 | 第32-33页 |
| 第二节 实验方法 | 第33-38页 |
| 一、 突变体质粒的构建以及突变体蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| 1 引物设计 | 第33页 |
| 2 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3 PCR扩增产物的回收 | 第34页 |
| 4 PCR产物的平末端磷酸化 | 第34-35页 |
| 5 连接反应 | 第35页 |
| 6 转化与筛选 | 第35-36页 |
| 7 突变体蛋白质的纯化 | 第36页 |
| 8 突变体蛋白的浓度测定 | 第36页 |
| 二、 分子伴侣活性的检测 | 第36-37页 |
| 三、 园二色性光谱的测量 | 第37页 |
| 四、 ANS结合荧光光谱 | 第37页 |
| 五、 排阻层析色谱 | 第37-38页 |
| 六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38页 |
| 七、 内源荧光光谱测量 | 第38页 |
| 第三节 实验结果 | 第38-49页 |
| 一、 G59W突变体质粒的构建以及突变体蛋白质的纯化 | 第38-40页 |
| 1 突变体质粒构建 | 第38-39页 |
| 2 突变体蛋白质纯化的结果 | 第39-40页 |
| 二、 分子伴侣活性检测结果 | 第40-41页 |
| 三、 CD光谱的测量结果 | 第41-44页 |
| 四、 ANS荧光光谱 | 第44页 |
| 五、 排阻层析色谱 | 第44-45页 |
| 六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45-47页 |
| 七、 内源荧光检测结果 | 第47-49页 |
| 第四节 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 融合基因的克隆与表达 | 第52-63页 |
| 引言 | 第52页 |
| 第一节 实验材料 | 第52-53页 |
| 第二节 实验步骤 | 第53-58页 |
| 一、 引物设计 | 第53页 |
| 二、 融合基因的获得 | 第53-55页 |
| 1 PCR分别扩增Hsp16.3和38kDa基因 | 第54页 |
| 2 PCR产物琼脂糖凝胶电泳回收 | 第54页 |
| 3 PCR扩增Hsp16.3和38kDa的融合基因 | 第54-55页 |
| 三、 融合基因和质粒载体的酶切 | 第55-56页 |
| 四、 酶切产物的连接 | 第56页 |
| 五、 连接产物的转化 | 第56页 |
| 六、 重组子的鉴定 | 第56-57页 |
| 1 快速裂解及质粒大小的鉴定 | 第56页 |
| 2 PCR初步鉴定 | 第56-57页 |
| 3 酶切鉴定 | 第57页 |
| 4 测序鉴定 | 第57页 |
| 七、 融合蛋白的表达 | 第57-58页 |
| 第三节 结果 | 第58-60页 |
| 一、 融合蛋白的表达 | 第58-59页 |
| 二、 融合蛋白的可溶性 | 第59-60页 |
| 第四节 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 Hsp16.3蛋白细胞内抗氧化功能研究 | 第63-74页 |
| 引言 | 第63页 |
| 第一节 实验材料 | 第63页 |
| 第二节 实验方法 | 第63-68页 |
| 一、 Hsp16.3基因、38kDa基因的克隆 | 第63-68页 |
| 1 引物设计和合成 | 第64页 |
| 2 PCR扩增目的基因 | 第64-65页 |
| 3 目的基因与质粒载体的酶切 | 第65页 |
| 4 酶切产物的连接 | 第65-66页 |
| 5 连接产物的转化 | 第66页 |
| 6 重组子的筛选与鉴定 | 第66页 |
| 7 电转化 | 第66-67页 |
| 1 ). 耻垢分枝杆菌感受态细胞的制备 | 第66-67页 |
| 2 ). 电转化 | 第67页 |
| 8 Hsp16.3外源蛋白的表达与鉴定 | 第67-68页 |
| 二、 Hsp16.3抗氧化功能 | 第68页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第68-74页 |
| 一、 Hsp16.3外源蛋白的表达与鉴定 | 第68-72页 |
| 1 重组质粒的酶切结果 | 第68-69页 |
| 2 15％SDS-PAGE凝胶检测结果 | 第69-70页 |
| 3 Western Blotting结果 | 第70-72页 |
| 二、 抗氧化结果 | 第72-74页 |
| 第五章 Hsp16.3蛋白细胞内底物的筛选 | 第74-80页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| 第一节 实验材料 | 第75-76页 |
| 第二节 实验方法 | 第76-77页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第77-80页 |
| 第六章 结论 | 第80-81页 |
| 第七章 参考文献 | 第81-86页 |
| 第二部分 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究 | 第86-98页 |
| 前言 | 第87-88页 |
| 第一节 材料和方法 | 第88-90页 |
| 一、 材料 | 第88页 |
| 二、 方法 | 第88-90页 |
| 1 M.BCG基因组DNA的提取与纯化 | 第88页 |
| 2 引物设计及目的基因的PCR扩增 | 第88页 |
| 3 基因敲除质粒的构建及鉴定 | 第88-89页 |
| 4 M.BCG感受态细胞的制备及电转化 | 第89页 |
| 5 MDP1基因敲除菌株的筛选与鉴定 | 第89-90页 |
| 6 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定 | 第90页 |
| 第二节 结果 | 第90-94页 |
| 一、 目的基因MDP1的PCR扩增产物 | 第90-91页 |
| 二、 pKO-MDP1敲除质粒的酶切鉴定 | 第91-92页 |
| 三、 敲除菌株的筛选与鉴定 | 第92-93页 |
| 四、 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定 | 第93-94页 |
| 第三节 讨论 | 第94-96页 |
| 第四节 参考文献 | 第96-98页 |
| 第三部分 热休克蛋白的研究进展 | 第98-133页 |
| 引言 | 第99页 |
| 一、 热休克蛋白的分类 | 第99-100页 |
| 二、 热休克蛋白的转录调节 | 第100-102页 |
| 三、 热休克蛋白家族简介 | 第102-119页 |
| 1 Hsp100 | 第102-103页 |
| 2 Hsp90 | 第103-104页 |
| 3 Hsp70 | 第104-107页 |
| 4 Hsp60和Hsp10 | 第107-110页 |
| 5 小分子热休克蛋白 | 第110-119页 |
| 1 ). 小分子热休克蛋白的结果特点 | 第110-111页 |
| 2 ). 小分子热休克蛋白的生理作用 | 第111-113页 |
| (1) 保护细胞骨架 | 第111-112页 |
| (2) sHsp与细胞的生长和分化 | 第112页 |
| (3) sHsp与细胞凋亡 | 第112-113页 |
| 3 ). 小分子热休克蛋白的分子伴侣机制 | 第113-114页 |
| 4 ). 小分子热休克蛋白与疾病 | 第114-116页 |
| 5 ). 小分子热休克蛋白可以作为药物靶点 | 第116-117页 |
| 6 ). 小分子热休克蛋白的磷酸化 | 第117页 |
| 7 ). 小分子热休克蛋白举例 | 第117-119页 |
| (1) Alpha-crystallin | 第117-118页 |
| (2) Hsp16.3 | 第118-119页 |
| 四、 展望 | 第119-121页 |
| 五、 参考文献 | 第121-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
