| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.EGFR及其生物学功能 | 第9-12页 |
| ·EGFR的结构特征 | 第9-10页 |
| ·EGFR信号传导通路 | 第10-12页 |
| 2.EGFR信号通路与肿瘤 | 第12-15页 |
| ·EGFR过度表达 | 第13页 |
| ·EGFR酪氨酸激酶区突变 | 第13页 |
| ·EGFR基因重排 | 第13-14页 |
| ·配体自分泌机制 | 第14-15页 |
| 3.靶向EGFR肿瘤治疗进展 | 第15-19页 |
| ·小分子酪氨酸激酶抑制剂 | 第15-16页 |
| ·靶向EGFR单克隆抗体 | 第16-17页 |
| ·EGFR靶向主动免疫治疗 | 第17-19页 |
| 第二章 异种EGFR胞外区重组DNA疫苗与蛋白质疫苗的构建 | 第19-42页 |
| 1.实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·培养基及主要溶液 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌操作相关试剂 | 第20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂、缓冲液 | 第20页 |
| ·质粒大量制备相关试剂 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE相关试剂、缓冲液 | 第21页 |
| ·WESTERN BOLT相关试剂、缓冲液 | 第21页 |
| ·PROTEIN A-SEPHAROSE FAST FLOW蛋白层析缓冲液 | 第21页 |
| ·其他溶液、缓冲液 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.实验方法 | 第22-36页 |
| ·鸡睾丸组织cDNA的获得 | 第22-23页 |
| ·鸡睾丸组织总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·鸡睾丸组织总RNA反转录 | 第23页 |
| ·重叠延伸拼接PCR扩增cEGFR-Fc融合基因 | 第23-25页 |
| ·DNA疫苗质粒pVAX1-cEGFR-Fc的制备 | 第25-30页 |
| ·PCR产物的回收 | 第25页 |
| ·PCR产物TA克隆 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌DH5A感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5A感受态细胞 | 第26页 |
| ·大肠杆菌转化子的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒DNA提取 | 第27页 |
| ·酶切鉴定质粒 | 第27-28页 |
| ·重组质粒PVAX1-cEGFR-Fc的构建 | 第28-30页 |
| ·pET-28A(+)-S-cEGFR-Fc表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·cEGFR-Fc重组蛋白的表达、鉴定及纯化 | 第32-36页 |
| ·cEGFR-Fc重组蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第32-33页 |
| ·免疫印记(WESTERN BLOT)法检测表达产物 | 第33页 |
| ·重组工程菌的发酵及发酵液预处理 | 第33-35页 |
| ·PROTEIN A-SEPHAROSE FAST FLOW亲和层析纯化目的蛋白 | 第35页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第35-36页 |
| 3.实验结果 | 第36-40页 |
| ·鸡睾丸组织总RNA提取 | 第36页 |
| ·重叠延伸拼接PCR扩增cEGFR-Fc融合基因 | 第36页 |
| ·测序鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒鉴定及序列分析 | 第37-38页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| ·表达产物WESTERN BLOT鉴定 | 第39-40页 |
| ·发酵液目的蛋白纯化和鉴定 | 第40页 |
| 4.讨论 | 第40-41页 |
| 5.小结 | 第41-42页 |
| 第三章 DNA疫苗和蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤的作用研究 | 第42-53页 |
| 1.实验材料 | 第42-43页 |
| ·动物和细胞系 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·主要溶液配制 | 第43页 |
| ·主要实验仪器 | 第43页 |
| 2.实验方法 | 第43-46页 |
| ·细胞培养和收集 | 第43页 |
| ·DNA疫苗和蛋白质疫苗免疫动物 | 第43-44页 |
| ·小鼠LEWIS肺癌模型的建立 | 第44页 |
| ·肿瘤生长曲线的绘制并计算抑瘤率 | 第44页 |
| ·WESTERN BLOT法检测小鼠血清中抗EGFR抗体 | 第44页 |
| ·酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清抗EGFR抗体效价 | 第44-45页 |
| ·细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性的检测 | 第45页 |
| ·安全性观察 | 第45-46页 |
| ·统计学分析 | 第46页 |
| 3.实验结果 | 第46-50页 |
| ·重组疫苗的抗肿瘤效果 | 第46-48页 |
| ·肿瘤体积的测量 | 第46页 |
| ·肿瘤重量和抑瘤率 | 第46-48页 |
| ·重组疫苗免疫诱导产生抗自身免疫反应 | 第48-49页 |
| ·WESTERN BLOT法检测小鼠血清中抗EGFR抗体 | 第48-49页 |
| ·ELISA法测定血清抗EGFR抗体效价 | 第49页 |
| ·CTL杀伤活性检测 | 第49-50页 |
| ·安全性观察 | 第50页 |
| 4.讨论 | 第50-52页 |
| 5.小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者攻读研究生期间发表论文情况 | 第60-61页 |
