| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-26页 |
| ·鱼用疫苗研究 | 第9-13页 |
| ·鱼类免疫学基础 | 第9-10页 |
| ·鱼用疫苗的种类 | 第10-11页 |
| ·抗原基因的筛选 | 第11-13页 |
| ·细菌多种药物耐受现象和外排泵研究 | 第13-17页 |
| ·多种药物耐受现象 | 第13-14页 |
| ·外排泵 | 第14-17页 |
| ·大肠杆菌acrAB 操纵元的研究 | 第17-20页 |
| ·AcrR 对acrAB 操纵元的负调控 | 第17-18页 |
| ·整体调控因子对acrAB 操纵元的正调控 | 第18-20页 |
| ·迟缓爱德华氏菌的研究 | 第20-25页 |
| ·迟缓爱德华氏菌疫苗研究 | 第20-21页 |
| ·迟缓爱德华氏菌分泌系统研究 | 第21-23页 |
| ·迟缓爱德华氏菌抗原蛋白研究 | 第23-24页 |
| ·迟缓爱德华氏菌耐药性研究 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第25-26页 |
| 第二章 迟缓爱德华氏菌保护性抗原蛋白筛选 | 第26-49页 |
| ·材料和方法 | 第26-39页 |
| ·原核表达系统的构建 | 第27-32页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·蛋白基因的PCR 扩增 | 第28-30页 |
| ·pET 表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化 | 第32-38页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE 分析 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第35-38页 |
| ·保护性抗原蛋白筛选 | 第38-39页 |
| ·鱼体的免疫 | 第38页 |
| ·攻毒试验 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-45页 |
| ·基因组DNA 提取结果 | 第39页 |
| ·基因的PCR 扩增结果 | 第39-40页 |
| ·蛋白诱导表达结果 | 第40-43页 |
| ·优化的蛋白表达和纯化条件 | 第43-44页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白对牙鲆保护效应检测结果 | 第45页 |
| ·讨论和分析 | 第45-49页 |
| ·重组蛋白的克隆、表达和纯化 | 第45-46页 |
| ·鱼类免疫实验的影响因素 | 第46-47页 |
| ·EseD 和Et18 具有免疫保护效应 | 第47-49页 |
| 第三章 EseD 和Et18 融合蛋白的表达和保护效应检测 | 第49-60页 |
| ·材料和方法 | 第49-55页 |
| ·EseD 和Et18 融合蛋白表达载体的构建 | 第49-52页 |
| ·Et18 插入片段的构建 | 第49-51页 |
| ·载体的处理 | 第51页 |
| ·构建pETEEH 表达质粒 | 第51-52页 |
| ·重组融合蛋白EEH 的表达、纯化和保护性检测 | 第52页 |
| ·ELISA 检测 | 第52-54页 |
| ·Western blotting 检测 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·构建成融合蛋白EEH 表达载体 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白EEH 的表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·融合蛋白EEH 对牙鲆保护效应检测结果 | 第57页 |
| ·ELISA 检测结果 | 第57页 |
| ·Western blotting 结果 | 第57-58页 |
| ·讨论和分析 | 第58-60页 |
| ·融合蛋白EEH 具有较好的免疫保护效应 | 第58页 |
| ·重组蛋白的ELISA 和Western blotting | 第58-60页 |
| 第四章 迟缓爱德华氏菌acrAB 操纵元的克隆 | 第60-70页 |
| ·材料和方法 | 第60-63页 |
| ·迟缓爱德华氏菌染色体步移文库的构建 | 第60-61页 |
| ·迟缓爱德华氏菌acrAB 操纵元全序列的克隆 | 第61-63页 |
| ·acrA 部分序列的克隆 | 第61-62页 |
| ·acrAB 操纵元全序列的克隆 | 第62-63页 |
| ·蛋白序列分析 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-65页 |
| ·迟缓爱德华氏菌acrAB 操纵元序列 | 第63-64页 |
| ·AcrA、AcrB 和AcrR 序列分析 | 第64-65页 |
| ·讨论和分析 | 第65-70页 |
| ·迟缓爱德华氏菌acrAB 操纵元的构成 | 第65页 |
| ·迟缓爱德华氏菌的AcrA、AcrB 和AcrR 分析 | 第65-70页 |
| 第五章 迟缓爱德华氏菌acrAB 操纵元的启动子和AcrR 结合位点分析 | 第70-79页 |
| ·材料和方法 | 第70-76页 |
| ·AcrR 表达载体的构建 | 第72页 |
| ·启动子活性分析 | 第72-74页 |
| ·acrAB 启动子活性分析 | 第73-74页 |
| ·acrR 启动子活性分析 | 第74页 |
| ·acrAB 操纵元启动子的突变分析 | 第74-75页 |
| ·acrAB 启动子突变 | 第75页 |
| ·acrR 启动子突变 | 第75页 |
| ·AcrR 在acrAB 操纵元上的结合位点分析 | 第75-76页 |
| ·启动子的定点突变 | 第75-76页 |
| ·AcrR 在acrAB 操纵元上结合位点的定位 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-77页 |
| ·野生型和突变型启动子分析结果 | 第76-77页 |
| ·启动子的序列特征 | 第77页 |
| ·讨论和分析 | 第77-79页 |
| ·acrAB 和acrR 启动子特征 | 第77-78页 |
| ·大肠杆菌AcrR 对本实验结果的影响分析 | 第78-79页 |
| 第六章 AcrR 诱导物筛选和蛋白结构分析 | 第79-90页 |
| ·材料和方法 | 第79-85页 |
| ·药物对AcrR 的诱导效应分析 | 第79-80页 |
| ·诱导物对acrAB 操纵元基因表达的影响 | 第80-83页 |
| ·AcrR 缺失突变和定点突变分析 | 第83-85页 |
| ·AcrR C 端缺失突变 | 第83-84页 |
| ·AcrR 定点突变 | 第84页 |
| ·突变效应分析 | 第84-85页 |
| ·实验结果 | 第85-87页 |
| ·诱导物筛选结果 | 第85-86页 |
| ·Acriflavine 和Methyl Viologen 对acrA 和acrR 表达的影响 | 第86-87页 |
| ·AcrR 缺失突变和定点突变对其活性的影响 | 第87页 |
| ·讨论和分析 | 第87-90页 |
| ·迟缓爱德华氏菌AcrR 的诱导物 | 第87-88页 |
| ·迟缓爱德华氏菌AcrR 的结构分析 | 第88-90页 |
| 第七章 acrR 过量表达分析 | 第90-95页 |
| ·材料和方法 | 第90-92页 |
| ·acrR 过量表达迟缓爱德华氏菌株的构建 | 第90-91页 |
| ·质粒的构建 | 第90页 |
| ·菌株的构建 | 第90-91页 |
| ·耐药性分析 | 第91页 |
| ·生长状况分析 | 第91-92页 |
| ·毒力分析 | 第92页 |
| ·实验结果 | 第92-94页 |
| ·耐药性分析结果 | 第92-93页 |
| ·生长状况分析结果 | 第93页 |
| ·毒力分析结果 | 第93-94页 |
| ·讨论和分析 | 第94-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 博士期间发表的论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
