| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-22页 |
| ·热休克蛋白(HSPs)概述 | 第8-10页 |
| ·热休克蛋白的基本性质 | 第8-9页 |
| ·热休克蛋白的生物学功能 | 第9-10页 |
| ·热休克蛋白作为分子伴侣的基本功能 | 第9页 |
| ·热休克蛋白具有肿瘤免疫原性 | 第9-10页 |
| ·热休克蛋白 gp96 的概述 | 第10-19页 |
| ·热休克蛋白 gp96 在免疫反应中的分子生物学背景 | 第10-13页 |
| ·热休克蛋白 gp96 的结构与特性 | 第10-12页 |
| ·热休克蛋白 gp96 与肽的相互作用 | 第12-13页 |
| ·gp96 的免疫调控作用 | 第13-18页 |
| ·gp96-肽复合物引起特异性免疫反应 | 第14-15页 |
| ·不依赖于多肽的 gp96 引起非特异性免疫反应 | 第15-17页 |
| ·gp96 调控免疫反应 | 第17-18页 |
| ·gp96 受体的鉴定 | 第18-19页 |
| ·gp96 作为治疗性疫苗在临床实际应用的前景 | 第19-21页 |
| ·gp96 与抗原肽结合部位相关研究的进展及其意义 | 第21-22页 |
| 2. 人热休克蛋白GP96 N33769-337△40 基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第22-47页 |
| ·材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·主要材料及试剂 | 第22-23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-36页 |
| ·引物设计及合成 | 第25页 |
| ·技术路线 | 第25-28页 |
| ·PCR 扩增条件 | 第28页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第28-31页 |
| ·PCR 产物纯化、回收 | 第28-29页 |
| ·外源片段与T 载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·重组质粒DNA 的转化 | 第29-30页 |
| ·克隆产物的鉴定 | 第30-31页 |
| ·亚克隆 | 第31-34页 |
| ·重组DNA 的构建 | 第31-34页 |
| ·pGex6p-1 质粒载体的提取、纯化 | 第31-32页 |
| ·目的片段的酶切 | 第32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·制备 Ecoli BL21 感受态(方法同前) | 第33页 |
| ·转化 Ecoli BL21 感受态(方法同前) | 第33页 |
| ·挑选阳性克隆并鉴定 | 第33-34页 |
| ·序列测定与分析 | 第34页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·诱导表达 | 第34页 |
| ·SDS—PAGE 电泳 | 第34页 |
| ·蛋白表达条件的观察 | 第34-35页 |
| ·不同时相融合蛋白的表达 | 第34-35页 |
| ·不同诱导剂浓度下融合蛋白的表达 | 第35页 |
| ·目的蛋白GST 纯化 | 第35-36页 |
| ·Western-blot 检测重组蛋白的抗原性 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-47页 |
| ·PCR 扩增N337 的结果 | 第36-37页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第37-39页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增N337 目的片段鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·质粒 pMD-N337 和质粒 pGex6p-1 双酶切结果 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第40-42页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增N337 目的片段鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·目的片段插入 pET-28a 后的重组质粒的测序结果 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白时相表达结果 | 第43页 |
| ·不同诱导剂浓度下融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白GST 纯化 | 第44-45页 |
| ·Western-blot 检测重组蛋白的抗原性 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 4 结论 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
