| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 1 引言 | 第11-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第14页 |
| ·供试培养基 | 第14页 |
| ·供试药品及主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·特异性抑制剂对玉米大斑病菌生长发育及致病性的影响 | 第15-16页 |
| ·不同浓度抑制剂对玉米大斑病菌生长发育的影响 | 第15页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌孢子萌发及侵染的影响 | 第15页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌HT-毒素活性的影响 | 第15页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌致病性的影响 | 第15-16页 |
| ·玉米大斑病菌PKC 基因同源重组载体的构建 | 第16-23页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第16页 |
| ·PKC 基因敲除片段的PCR 扩增 | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆测序 | 第18-19页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第19页 |
| ·PKC 基因敲除载体第一步重组 | 第19-20页 |
| ·PKC 基因敲除载体第二步重组 | 第20-21页 |
| ·PKC 基因敲除载体第三步重组 | 第21-22页 |
| ·整体验证同源重组载体的正确性 | 第22-23页 |
| ·玉米大斑病菌PKC 基因反义表达载体的构建 | 第23-26页 |
| ·玉米大斑病菌总RNA 的提取 | 第23页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第23-24页 |
| ·PKC 基因部分开放阅读框的扩增 | 第24页 |
| ·pSO1 质粒的酶切验证 | 第24页 |
| ·连接 | 第24-25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·反义表达载体的验证 | 第25-26页 |
| ·玉米大斑病菌原生质体制备的条件优化 | 第26-27页 |
| ·原生质体制备 | 第26页 |
| ·菌龄对原生质体制备的影响 | 第26页 |
| ·不同酶系统对原生质体制备的影响 | 第26页 |
| ·酶浓度对原生质体制备的影响 | 第26-27页 |
| ·酶解温度对原生质体制备的影响 | 第27页 |
| ·酶解时间对原生质体制备的影响 | 第27页 |
| ·玉米大斑病菌遗传转化及转化子的筛选 | 第27-28页 |
| ·重组基因片段的制备 | 第27页 |
| ·原生质体的纯化 | 第27页 |
| ·原生质体的转化与再生 | 第27页 |
| ·潮霉素B 浓度的确定 | 第27-28页 |
| ·基因敲除突变体与反义表达突变体的筛选 | 第28页 |
| ·转化子的PCR 确认 | 第28页 |
| ·玉米大斑病菌PKC 基因敲除突变体的形态特征 | 第28页 |
| ·突变菌株生长速度的测定 | 第28页 |
| ·突变菌菌落形态的观察 | 第28页 |
| ·PKC 基因上游启动子序列的获得 | 第28-30页 |
| ·模板DNA 的制备和引物的设计 | 第29页 |
| ·Genome Walking PCR 扩增 | 第29页 |
| ·启动子分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-54页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌生长发育及致病性的影响 | 第30-32页 |
| ·不同浓度抑制剂对玉米大斑病菌生长发育的影响 | 第30页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌孢子萌发及侵染的影响 | 第30-32页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌HT-毒素活性的影响 | 第32页 |
| ·抑制剂对玉米大斑病菌致病力的影响 | 第32页 |
| ·PKC 基因同源重组载体的构建 | 第32-41页 |
| ·PKC 基因敲除载体的构建策略 | 第32-34页 |
| ·扩增PKC 基因片段引物的设计 | 第34页 |
| ·PKC 基因片段的PCR 扩增 | 第34页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆测序 | 第34-36页 |
| ·PKC 基因敲除第一步重组载体pBS-B 的构建 | 第36-37页 |
| ·PKC 基因敲除第二步重组载体pBS-HPH-B 的构建 | 第37-39页 |
| ·PKC 基因敲除第三步重组载体pBS-A-HPH-B 的构建 | 第39-40页 |
| ·整体验证同源重组载体的正确性 | 第40-41页 |
| ·反义诱导表达载体的构建 | 第41-45页 |
| ·诱导表达载体的构建策略 | 第41-42页 |
| ·PKC 基因引物的设计 | 第42页 |
| ·反义表达片段的扩增 | 第42-43页 |
| ·pSO1 质粒的酶切验证 | 第43-44页 |
| ·反义诱导表达载体的验证 | 第44-45页 |
| ·新构建载体的保存 | 第45-46页 |
| ·玉米大斑病菌原生质体制备的条件优化 | 第46-47页 |
| ·原生质体的形成 | 第46页 |
| ·影响原生质体制备的因素 | 第46-47页 |
| ·玉米大斑病菌遗传转化及转化子的筛选 | 第47-51页 |
| ·重组DNA 片段的PCR 扩增 | 第47-48页 |
| ·原生质体的再生 | 第48页 |
| ·潮霉素B 浓度的确定 | 第48-49页 |
| ·突变体的筛选 | 第49页 |
| ·基因敲除突变体的PCR 验证 | 第49-50页 |
| ·PKC 基因敲除突变体的表性分析 | 第50-51页 |
| ·PKC 基因启动子序列的获得 | 第51-54页 |
| ·引物的设计 | 第51页 |
| ·PKC 基因启动子序列分析 | 第51-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·PKC 特异性抑制剂的研究 | 第54页 |
| ·白屈菜赤碱对玉米大斑病菌侵染的影响 | 第54-55页 |
| ·基因敲除突变体的研究 | 第55页 |
| ·有关反义抑制技术 | 第55-56页 |
| ·Genome Walking 技术获得已知基因片段的侧翼序列 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
