| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·水稻条纹叶枯病的发生及病害症状 | 第10-11页 |
| ·水稻条纹病毒（RSV）的致病机理研究进展 | 第11-14页 |
| ·RSV 的基因组结构 | 第11-12页 |
| ·RSV 编码的主要蛋白及功能 | 第12-13页 |
| ·RdRp | 第12-13页 |
| ·外壳蛋白（CP） | 第13页 |
| ·病害特异性蛋白（SP） | 第13页 |
| ·CP 与SP 在RSV 致病过程中的重要性研究 | 第13-14页 |
| ·转基因研究及其在水稻上的应用 | 第14-19页 |
| ·转基因技术应用 | 第14-16页 |
| ·根癌农杆菌介导的水稻转化 | 第16-17页 |
| ·根癌农杆菌转化水稻的影响因素 | 第17页 |
| ·水稻的品种 | 第17页 |
| ·外植体的材料 | 第17页 |
| ·转化过程中的选择性标记基因 | 第17-18页 |
| ·农杆菌介导基因转化系统的优点 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的意义 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-39页 |
| ·RSV CP 基因及其与叶绿体RUBISCO SSU 引导肽融合基因克隆载体的构建 | 第21-30页 |
| ·材料和试剂 | 第21页 |
| ·供试植株和毒源 | 第21页 |
| ·供试载体及菌株 | 第21页 |
| ·试验试剂 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-30页 |
| ·水稻叶片RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增Rubisco SSU 和RSV CP 基因 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第24页 |
| ·大肠杆菌DH5α菌株感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·目的片段和pMD-18T 载体的连接 | 第25页 |
| ·连接产物向大肠杆菌转化 | 第25页 |
| ·重组质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第26-27页 |
| ·带特定酶切位点的Rubisco SSU 引导肽基因的扩增和克隆 | 第27-28页 |
| ·pGEX-PR 和pET-PR-S 表达载体的构建 | 第28页 |
| ·带特定酶切位点的CP 基因的扩增和克隆 | 第28-29页 |
| ·PR-CP 和PR-S-CP 融合基因的构建 | 第29-30页 |
| ·适合农杆菌介导水稻转化的转化载体的构建 | 第30-33页 |
| ·材料和试剂 | 第30-31页 |
| ·供试基因 | 第30页 |
| ·载体和菌株 | 第30页 |
| ·试验试剂 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·pTCK-CP 转化载体的构建 | 第31页 |
| ·带特定酶切位点的CP 基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·带特定酶切位点的pTCK 载体的改造 | 第32页 |
| ·带特定酶切位点的PR-S-CP 融合基因的扩增 | 第32页 |
| ·pTCK-PR-CP 融合基因转化载体的构建 | 第32-33页 |
| ·农杆菌介导的水稻的转化 | 第33-37页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·供试水稻品种 | 第33页 |
| ·植物转化载体 | 第33页 |
| ·培养基配方 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·构建的植物转化载体向农杆菌EHA105 菌株的转化 | 第33-34页 |
| ·农杆菌EHA105 菌株感受态的制备 | 第33-34页 |
| ·重组质粒向农杆菌的转化 | 第34页 |
| ·转化后对重组农杆菌EHA105 的PCR 鉴定 | 第34页 |
| ·根癌农杆菌介导的水稻转化 | 第34-37页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第34-35页 |
| ·愈伤组织的继代培养 | 第35页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第35页 |
| ·水稻愈伤组织的预培养 | 第35页 |
| ·水稻愈伤组织与农杆菌的共培养 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌的洗除 | 第36页 |
| ·抗性愈伤的筛选 | 第36页 |
| ·培养基对抗性愈伤分化能力的影响 | 第36-37页 |
| ·抗性愈伤组织的分化培养 | 第37页 |
| ·转基因植株的再生及幼苗移栽 | 第37页 |
| ·转基因水稻的分子鉴定以及RSV 的致病机理研究 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·供试水稻品种 | 第37页 |
| ·植物转化载体 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·转基因水稻基因组DNA 的PCR 检测 | 第37-38页 |
| ·CTAB 法小量提取水稻叶片DNA | 第37-38页 |
| ·PCR 检测 | 第38页 |
| ·转基因水稻的GUS 活性分析 | 第38页 |
| ·转基因水稻的遗传分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-57页 |
| ·RSV CP 基因及其与叶绿体RUBISCO SSU 引导肽融合 | 第39-47页 |
| ·Rubisco SSU 和RSV CP 基因的PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·pMD-R 和pMD-CP 克隆载体的构建 | 第40-41页 |
| ·带特定酶切位点的PR 和PR-S 的扩增和克隆 | 第41-43页 |
| ·pGEX-PR 和pET-PR-S 表达载体的构建 | 第43页 |
| ·带特定酶切位点的CP 基因的扩增和克隆 | 第43-45页 |
| ·PR-CP 和PR-S-CP 融合基因的构建 | 第45-47页 |
| ·适合农杆菌介导水稻转化的转化载体的构建 | 第47-48页 |
| ·pTCK-CP 转化载体的构建 | 第47-48页 |
| ·pTCK-PR-CP 融合基因转化载体的构建 | 第48页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第48-53页 |
| ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导 | 第48-49页 |
| ·水稻愈伤组织与农杆菌的共培养及抗性愈伤的筛选 | 第49-51页 |
| ·培养基对抗性愈伤分化能力的影响 | 第51页 |
| ·抗性愈伤组织的分化培养及转基因植株的获得 | 第51-53页 |
| ·转基因水稻的分析 | 第53-57页 |
| ·转基因水稻的GUS 活性分析和PCR 鉴定 | 第53-54页 |
| ·转基因水稻的后代分离情况分析 | 第54-55页 |
| ·转基因水稻的几个主要农艺性状调查 | 第55-57页 |
| 4 小结与讨论 | 第57-61页 |
| ·载体的构建 | 第57页 |
| ·农杆菌介导的水稻转化 | 第57-59页 |
| ·转基因植株的检测分析 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
