鸡枞菌与淡色库蚊及家蝇中漆酶编码基因的克隆与表达
| 致谢 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 1 引言 | 第17-37页 |
| ·漆酶的基本特性 | 第17-20页 |
| ·漆酶的来源与分布 | 第17页 |
| ·漆酶的结构 | 第17-18页 |
| ·漆酶的催化机理 | 第18-19页 |
| ·漆酶的抑制 | 第19页 |
| ·漆酶的应用 | 第19-20页 |
| ·昆虫中漆酶的研究进展 | 第20-26页 |
| ·昆虫漆酶 | 第20-22页 |
| ·昆虫漆酶的分类 | 第22-26页 |
| ·昆虫漆酶的功能 | 第26页 |
| ·白蚁及共生真菌 | 第26-36页 |
| ·白蚁的分类 | 第26-27页 |
| ·共生真菌白蚁及其菌圃 | 第27-29页 |
| ·白蚁植物消化酶的来源 | 第29-31页 |
| ·白蚁共生真菌 | 第31-36页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第36-37页 |
| 2 黑翅土白蚁及其共生鸡枞菌漆酶的初步研究 | 第37-45页 |
| ·材料与方法 | 第37-39页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·酶液的制备 | 第38页 |
| ·漆酶的活力测定 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-43页 |
| ·黑翅土白蚁及其共生鸡枞菌中漆酶的分布 | 第39页 |
| ·温度对漆酶活性的影响 | 第39-40页 |
| ·pH值对漆酶活性的影响 | 第40-42页 |
| ·抑制因子 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 3 鸡枞菌漆酶的人工诱导培养 | 第45-52页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·菌种 | 第45-46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·培养方法 | 第46-47页 |
| ·漆酶的检测 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·不同培养基下漆酶的诱导培养 | 第47-48页 |
| ·愈创木酚的诱导培养 | 第48-49页 |
| ·CO_2诱导培养 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 4 鸡枞菌漆酶编码基因的克隆 | 第52-70页 |
| ·材料与方法 | 第52-60页 |
| ·鸡枞菌 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52-53页 |
| ·工具酶与试剂 | 第53页 |
| ·总RNA提取 | 第53页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第53-54页 |
| ·引物设计与漆酶cDNA片段的扩增 | 第54-56页 |
| ·5'-RACE | 第56-58页 |
| ·3'-RACE | 第58-59页 |
| ·漆酶基因DNA的克隆 | 第59-60页 |
| ·结果与分析 | 第60-68页 |
| ·鸡枞菌漆酶基因cDNA片段的克隆 | 第60-61页 |
| ·鸡枞菌漆酶基因cDNA末端克隆 | 第61-62页 |
| ·鸡枞菌漆酶基因全长cDNA的分离及验证 | 第62-63页 |
| ·鸡枞菌漆酶基因组序列及分析 | 第63-64页 |
| ·鸡枞菌漆酶氨基酸序列分析 | 第64-67页 |
| ·鸡枞菌漆酶与其它真菌漆酶的比较分析 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 5 鸡枞菌漆酶编码基因的异源表达 | 第70-79页 |
| ·材料与方法 | 第70-74页 |
| ·菌株与载体 | 第70页 |
| ·工具酶与试剂 | 第70-71页 |
| ·仪器 | 第71页 |
| ·培养基和溶液配制 | 第71-72页 |
| ·漆酶基因的克隆与鉴定 | 第72页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第72-73页 |
| ·漆酶的诱导表达 | 第73-74页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第74页 |
| ·酶活检测 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-78页 |
| ·漆酶基因的克隆与鉴定 | 第74-75页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第75-78页 |
| ·融合蛋白的鉴定 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 6 淡色库蚊和家蝇中漆酶编码基因的克隆 | 第79-101页 |
| ·材料与方法 | 第80-87页 |
| ·昆虫 | 第80页 |
| ·仪器 | 第80页 |
| ·工具酶与试剂 | 第80页 |
| ·总RNA提取 | 第80-81页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第81-82页 |
| ·引物设计与漆酶cDNA片段的扩增 | 第82-84页 |
| ·5'-RACE | 第84-86页 |
| ·3'-RACE | 第86-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-99页 |
| ·淡色库蚊幼虫及家蝇蛹的表皮总RNA的提取 | 第87-88页 |
| ·淡色库蚊及家蝇漆酶基因cDNA片段的克隆 | 第88页 |
| ·淡色库蚊漆酶基因cDNA末端克隆 | 第88-91页 |
| ·淡色库蚊漆酶基因全长cDNA的分离及验证 | 第91页 |
| ·淡色库蚊和家蝇漆酶氨基酸序列分析 | 第91-97页 |
| ·淡色库蚊漆酶与其它昆虫漆酶的比较分析 | 第97-99页 |
| ·讨论 | 第99-101页 |
| 7 淡色库蚊漆酶与抗药性的研究 | 第101-112页 |
| ·材料与方法 | 第101-104页 |
| ·昆虫材料及抗药性筛选 | 第101-102页 |
| ·仪器 | 第102页 |
| ·工具酶与试剂 | 第102页 |
| ·RT-PCR分析 | 第102-103页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第103-104页 |
| ·结果与分析 | 第104-108页 |
| ·漆酶在淡色库蚊中的表达模型 | 第104-105页 |
| ·漆酶在敏感和抗性品系中的表达 | 第105-108页 |
| ·讨论 | 第108-112页 |
| 8 总结 | 第112-114页 |
| ·鸡枞菌中漆酶的研究 | 第112-113页 |
| ·淡色库蚊中漆酶的研究 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-126页 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 | 第126页 |
