| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-21页 |
| ·CBF基因家族 | 第8-15页 |
| ·CBF基因 | 第8-9页 |
| ·CBF基因结构与特性 | 第9-10页 |
| ·CBF基因的调控因子 | 第10-12页 |
| ·CBF基因的生理生化功能 | 第12-14页 |
| ·CBF基因在抗逆条件下的交叉适应现象 | 第14页 |
| ·CBF基因在木本植物上的应用前景 | 第14-15页 |
| ·真核表达系统 | 第15-20页 |
| ·毕赤酵母细胞表达系统优缺点 | 第16-18页 |
| ·毕赤酵母细胞表达宿主菌 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母细胞表达载体 | 第19页 |
| ·外源基因在毕赤酵母中表达的优化措施 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 CBF3基因在毕赤酵母中的真核表达 | 第21-39页 |
| ·试验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·酶及试剂合 | 第21页 |
| ·试剂配方 | 第21-23页 |
| ·试验方法 | 第23-27页 |
| ·质粒提取 | 第23页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第23页 |
| ·载体质粒和目的基因的双酶切 | 第23-24页 |
| ·目的基因和pPIC9K质粒酶切产物的连接 | 第24页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌E.coliCompetentCellsJM109 | 第24页 |
| ·转化子鉴定 | 第24-25页 |
| ·线性化质粒DNA制备 | 第25页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| ·电击转化酵母GS115 | 第26页 |
| ·确定表型 | 第26页 |
| ·酵母PCR检测 | 第26页 |
| ·重组子在酵母中的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-38页 |
| ·pPIC9K-CBF3质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·质粒提取 | 第29页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第29页 |
| ·载体质粒和目的基因的双酶切 | 第29-30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌E.coliCompetentCellsJM109 | 第30页 |
| ·重组表达载体的构建与检测 | 第30-35页 |
| ·线性化质粒DNA制备及回收 | 第35页 |
| ·电击转化酵母GS115 | 第35-36页 |
| ·确定表型 | 第36-37页 |
| ·酵母PCR检测 | 第37页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中融合表达 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 3 CBF3基因转烟草研究 | 第39-46页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·菌种和模式植物 | 第39页 |
| ·生化试剂及相关配制 | 第39页 |
| ·引物 | 第39页 |
| ·培养基及悬浮液配方 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-43页 |
| ·植物表达重组载体pRCBF3菌液PCR检测 | 第40页 |
| ·外植体的选择 | 第40页 |
| ·烟草组织培养 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导转烟草及筛选 | 第41页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第41页 |
| ·RT-PCR检测 | 第41-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·pRCBF3菌液PCR检测 | 第43页 |
| ·烟草转化苗的获得 | 第43-44页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第44页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 4 结论与讨论 | 第46-49页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·真核表达载体与宿主菌的选择 | 第46-47页 |
| ·真核重组表达载体pPIC9K-CBF3的构建 | 第47页 |
| ·毕赤酵母表达载体的转化 | 第47页 |
| ·酵母发酵条件的优化 | 第47-48页 |
| ·转化烟草 | 第48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |