| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 缩略语表 | 第20-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-43页 |
| 1 病原学研究进展 | 第23-27页 |
| ·分类地位 | 第23-24页 |
| ·生物学特性 | 第24页 |
| ·血清型 | 第24-26页 |
| ·病原分子生物学 | 第26-27页 |
| 2 临床学研究进展 | 第27-33页 |
| ·流行病学 | 第27-28页 |
| ·临床症状及病理学研究 | 第28-31页 |
| ·临床剖检症状 | 第28-29页 |
| ·组织病理学研究 | 第29-30页 |
| ·血清生化指标变化 | 第30-31页 |
| ·诊断方法 | 第31-33页 |
| ·细菌分离鉴定 | 第31页 |
| ·琼脂凝胶免疫扩散试验 | 第31页 |
| ·凝集试验 | 第31页 |
| ·荧光抗体法 | 第31-32页 |
| ·间接ELISA检测 | 第32页 |
| ·PCR检测 | 第32-33页 |
| ·间接血凝试验 | 第33页 |
| ·间接免疫组织化学法 | 第33页 |
| 3 防治 | 第33-36页 |
| ·药物防治 | 第33-34页 |
| ·疫苗防治 | 第34-36页 |
| ·鸭疫里氏杆菌灭活菌苗的研究 | 第35页 |
| ·鸭疫里氏杆菌弱毒活菌苗的研究 | 第35-36页 |
| ·鸭疫里氏杆菌亚单位疫苗 | 第36页 |
| ·鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌二联苗的研究 | 第36页 |
| 4 细菌基因差异表达研究技术进展 | 第36-43页 |
| ·体内表达技术 | 第37页 |
| ·代表性差别分析技术 | 第37-38页 |
| ·信号标签诱变技术 | 第38页 |
| ·差异荧光诱导技术 | 第38页 |
| ·体内诱导抗原技术 | 第38页 |
| ·DNA微阵列技术 | 第38-39页 |
| ·选择性捕获转录序列 | 第39-43页 |
| ·SCOTS技术的原理 | 第40-42页 |
| ·细菌基因组的提取及核糖体rDNA的克隆 | 第41页 |
| ·细菌的体外培养及体内感染 | 第41页 |
| ·RNA的提取及cDNA合成 | 第41页 |
| ·选择性捕获转录序列 | 第41-42页 |
| ·SCOTS技术的优缺点 | 第42-43页 |
| ·SCOTS技术的优点 | 第42页 |
| ·SCOTS技术的缺点 | 第42-43页 |
| 第二章 鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的制备和应用 | 第43-56页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第43页 |
| 2 材料与方法 | 第43-50页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·血清 | 第43页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·主要溶液的配制 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-50页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的制备 | 第45页 |
| ·鸭疫里氏杆菌阳性血清的制备 | 第45-46页 |
| ·鸭疫里氏杆菌免疫原的制备 | 第45页 |
| ·鸭疫里氏杆菌免疫原的乳化 | 第45页 |
| ·动物免疫 | 第45-46页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的特异性试验 | 第46页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色抗原的敏感性试验 | 第46页 |
| ·抗体检出率试验 | 第46页 |
| ·染色抗原平板凝集试验与琼脂免疫扩散试验的对比 | 第46页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的使用方法及结果判断 | 第46-47页 |
| ·鸭疫里氏杆菌临床分离菌株血清型鉴定 | 第47页 |
| ·待检菌株抗原的制备 | 第47页 |
| ·血清学鉴定 | 第47页 |
| ·兔抗鸭IgG抗体的制备 | 第47-49页 |
| ·鸭血清IgG的粗提 | 第47-48页 |
| ·粗提鸭血清IgG的纯化 | 第48页 |
| ·鸭IgG的乳化 | 第48-49页 |
| ·家兔的免疫 | 第49页 |
| ·兔抗鸭IgG的粗提与纯化 | 第49页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗鸭IgG的制备 | 第49-50页 |
| ·兔抗鸭IgG HRP的标记 | 第49-50页 |
| ·兔抗鸭IgG-HRP效价的测定 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-53页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的特异性 | 第50页 |
| ·鸭疫里氏杆菌平板染色诊断抗原的敏感性 | 第50-51页 |
| ·平板凝集染色诊断抗原的重复性 | 第51-52页 |
| ·鸭疫里氏杆菌临床分离菌株血清型鉴定结果 | 第52页 |
| ·兔抗鸭IgG血清抗体水平及纯化后的浓度 | 第52-53页 |
| ·兔抗鸭IgG-HRP工作浓度测定 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·鸭疫里氏杆菌抗体检测 | 第53-54页 |
| ·鸭疫里氏杆菌血清分型 | 第54页 |
| ·关于免疫程序 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 第三章 鸭疫里氏杆菌OmpA基因的克隆、表达及重组OmpA蛋白免疫保护性试验研究 | 第56-73页 |
| 1 目的和意义 | 第56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-64页 |
| ·材料 | 第56-57页 |
| ·菌株和质粒 | 第56页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第56-57页 |
| ·主要溶液的配制 | 第57-59页 |
| ·抗生素类 | 第57页 |
| ·细菌培养基 | 第57页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第57-58页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第58页 |
| ·其它试剂的配制 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-64页 |
| ·鸭疫里氏杆菌复苏及基因组提取 | 第59页 |
| ·引物设计 | 第59页 |
| ·鸭疫里氏杆菌OmpA基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第60页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第60页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第60-61页 |
| ·连接产物的转化 | 第61页 |
| ·质粒的小量制备 | 第61页 |
| ·阳性克隆鉴定 | 第61-62页 |
| ·鸭疫里氏杆菌OmpA序列测定和分析 | 第62页 |
| ·重组表达质粒pGEX-OmpA的构建 | 第62页 |
| ·诱导表达 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE检测和Western-blot分析 | 第62-63页 |
| ·重组GST-OmpA蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·鉴定蛋白表达的形式(可溶性表达或形成包涵体) | 第63页 |
| ·包涵体的溶解和复性 | 第63-64页 |
| ·重组表达GST-OmpA蛋白的免疫保护性试验 | 第64页 |
| ·动物免疫 | 第64页 |
| ·攻毒剂量的确定 | 第64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-71页 |
| ·鸭疫里氏杆菌OmpA基因的克隆与测序 | 第64-68页 |
| ·鸭疫里氏杆菌OmpA基因PCR扩增结果 | 第64-65页 |
| ·目的片段的克隆及鉴定 | 第65页 |
| ·鸭疫里氏杆菌OmpA基因序列测定与分析 | 第65-68页 |
| ·表达载体pGEX-OmpA构建与鉴定 | 第68页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定 | 第68-70页 |
| ·重组OmpA蛋白的免疫保护性试验结果 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 第四章 鸭疫里氏杆菌间接OmpA-ELISA检测方法的建立和初步应用 | 第73-85页 |
| 1 研究目的和意义 | 第73页 |
| 2 材料与方法 | 第73-77页 |
| ·材料 | 第73-75页 |
| ·表达菌株和质粒 | 第73页 |
| ·血清 | 第73页 |
| ·包涵体提取用缓冲液的配制 | 第73-74页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第74-75页 |
| ·主要实验器材 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-77页 |
| ·包涵体提取 | 第75页 |
| ·包涵体的溶解和复性 | 第75页 |
| ·间接OmpA-ELISA操作步骤 | 第75页 |
| ·间接OmpA-ELISA最佳抗原包被量和血清稀释度的选择 | 第75-76页 |
| ·间接OmpA-ELISA判断标准的确定 | 第76页 |
| ·间接OmpA-ELISA特异性试验 | 第76页 |
| ·交叉性试验 | 第76页 |
| ·阻断试验 | 第76页 |
| ·细菌裂解液的处理 | 第76页 |
| ·间接OmpA-ELISA重复性试验 | 第76页 |
| ·间接OmpA-ELISA方法与平板凝集方法的对比试验 | 第76页 |
| ·包被抗原保存期的测定 | 第76-77页 |
| ·间接OmpA-ELISA诊断方法的初步应用 | 第77页 |
| ·重组表达GST-OmpA蛋白免疫血清效价检测 | 第77页 |
| ·临床送检血清检测 | 第77页 |
| 3 结果与分析 | 第77-82页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第77-78页 |
| ·间接OmpA-ELISA的判断标准 | 第78页 |
| ·特异性试验 | 第78-79页 |
| ·交叉性试验 | 第78-79页 |
| ·阻断试验 | 第79页 |
| ·细菌裂解液的应用 | 第79页 |
| ·重复性试验 | 第79-80页 |
| ·间接OmpA-ELISA方法与平板凝集方法的对比试验 | 第80-81页 |
| ·包被抗原保存期的测定 | 第81页 |
| ·间接OmpA-ELISA的临床应用 | 第81-82页 |
| ·重组表达GST-OmpA蛋白免疫血清效价检测 | 第81-82页 |
| ·临床送检血清检测 | 第82页 |
| 4 讨论 | 第82-84页 |
| ·重组表达蛋白的提取和复性 | 第82-83页 |
| ·包被抗原 | 第83-84页 |
| ·间接OmpA-ELISA检测方法 | 第84页 |
| 5 结论 | 第84-85页 |
| 第五章 应用选择性捕获转录序列技术筛选鸭疫里氏杆菌在感染鸭肝脏中差异表达基因的研究 | 第85-122页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第85页 |
| 2 材料与方法 | 第85-99页 |
| ·材料 | 第85-86页 |
| ·菌株和质粒 | 第85页 |
| ·工具酶和试剂 | 第85-86页 |
| ·试验动物 | 第86页 |
| ·主要试剂的配制 | 第86页 |
| ·主要仪器 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-99页 |
| ·RA-YM基因组的提取和生物素标记 | 第86-87页 |
| ·RA-YM基因组的提取 | 第86-87页 |
| ·RA-YM基因组的生物素标记 | 第87页 |
| ·引物设计 | 第87-89页 |
| ·RA-YM16S rRNA基因引物 | 第87页 |
| ·RA-YM23S rRNA基因引物 | 第87-88页 |
| ·SCOTS引物 | 第88页 |
| ·Rea-time RT-PCR引物 | 第88-89页 |
| ·RA-YM 16S rDNA和23S rDNA基因的扩增 | 第89-90页 |
| ·RA-YM 16S rRNA基因的扩增 | 第89页 |
| ·RA-YM 23S rDNA基因的扩增 | 第89-90页 |
| ·PCR产物回收与纯化 | 第90页 |
| ·PCR产物的克隆与测序 | 第90页 |
| ·感受态细胞制备(氯化钙法) | 第90页 |
| ·连接产物的转化 | 第90页 |
| ·质粒的小量制备(碱裂解法提取质粒) | 第90页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第90页 |
| ·RA-YM 16S rDNA和23S rDNA基因的序列分析 | 第90页 |
| ·生物素标记的RA-YM基因组和核糖体质粒的破碎 | 第90页 |
| ·试验动物感染及感染组织样品采集 | 第90-91页 |
| ·总RNA的提取 | 第91页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第91页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第91页 |
| ·总RNA的RNase-free DNase Ⅰ消化 | 第91-92页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第92-93页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第92页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第92-93页 |
| ·双链cDNA纯化与回收 | 第93页 |
| ·双链cDNA的扩增与回收 | 第93-94页 |
| ·双链cDNA的扩增 | 第93-94页 |
| ·双链cDNA的扩增产物的纯化与回收 | 第94页 |
| ·选择性捕获转录序列(SCOTS) | 第94-95页 |
| ·cDNAs样品杂交 | 第94-95页 |
| ·选择性捕获转录序列的回收 | 第95页 |
| ·感染过程中差异表达基因的选择性富集 | 第95-96页 |
| ·差异表达基因PCR产物的克隆 | 第96页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第96页 |
| ·连接产物的转化 | 第96-97页 |
| ·SCOTS克隆的PCR鉴定 | 第97页 |
| ·斑点杂交 | 第97-98页 |
| ·探针制备 | 第97页 |
| ·斑点杂交筛选阳性克隆 | 第97-98页 |
| ·阳性SCOTS克隆的测序及分析 | 第98页 |
| ·Real-time RT-PCR验证差异表达基因 | 第98-99页 |
| ·cDNA合成 | 第98-99页 |
| ·Real-time RT-PCR | 第99页 |
| 3 结果与分析 | 第99-115页 |
| ·RA-YM基因组的提取 | 第99-100页 |
| ·RA-YM16S rDNA基因的克隆与测序 | 第100-102页 |
| ·RA-YM16S rDNA基因扩增结果 | 第100页 |
| ·重组质粒pT-16S rDNA的鉴定 | 第100-101页 |
| ·RA-YM16S rRNA基因的序列 | 第101-102页 |
| ·RA-YM23S rDNA基因的扩增与测序 | 第102-105页 |
| ·RA-YM23S rDNA基因的扩增(分三段扩增) | 第102-103页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第103-104页 |
| ·RA-YM23srRNA基因的序列 | 第104-105页 |
| ·生物素标记的RA-YM基因组及核糖体质粒的破碎 | 第105-106页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第106-107页 |
| ·组织总RNA的提取和纯化 | 第106页 |
| ·细菌总RNA的提取和纯化 | 第106-107页 |
| ·双链cDNAPCR扩增 | 第107-108页 |
| ·选择性捕获转录序列结果 | 第108-109页 |
| ·第1轮SCOTS PCR扩增结果 | 第108页 |
| ·第2轮SCOTS PCR扩增结果 | 第108-109页 |
| ·第3轮SCOTS PCR扩增结果 | 第109页 |
| ·感染过程中差异表达基因的选择性富集结果 | 第109-110页 |
| ·差异表达基因的克隆 | 第110-111页 |
| ·斑点杂交筛选结果 | 第111页 |
| ·差异表达基因的Real-time RT-PCR验证结果 | 第111-112页 |
| ·基因归类分析 | 第112-115页 |
| 4 讨论 | 第115-121页 |
| ·生物合成和代谢 | 第116-118页 |
| ·适应性反应和相关调节 | 第118-120页 |
| ·适应性调节 | 第120页 |
| ·蛋白酶 | 第120-121页 |
| 5 结论 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-140页 |
| 研究生期间发表的主要论文 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
