斑点叉尾鮰天然Fab噬菌体抗体库的构建
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| ·抗体研究现状 | 第10-12页 |
| ·抗体发展简介 | 第10页 |
| ·基因工程抗体分类 | 第10-12页 |
| ·噬菌体抗体库的基础及技术路线 | 第12-13页 |
| ·抗体库分类 | 第13-14页 |
| ·抗体库构建原理 | 第14页 |
| ·抗体库技术特点 | 第14页 |
| ·丝状噬菌体简介 | 第14-16页 |
| ·丝状噬菌体的基本特征 | 第14-15页 |
| ·噬菌粒(Phagemid) | 第15页 |
| ·pComb3噬菌体载体系统 | 第15-16页 |
| ·鱼类抗体多样性的遗传机制 | 第16-17页 |
| ·影响抗体库质量的因素 | 第17-18页 |
| ·增加库容的方法 | 第17-18页 |
| ·增加多样性的方法 | 第18页 |
| ·抗体库的筛选 | 第18-19页 |
| ·噬菌体抗体库的应用 | 第19页 |
| 2 研究目的与意义 | 第19-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21-22页 |
| ·工具酶、Marker及试剂盒 | 第22页 |
| ·主要培养基和试剂 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-31页 |
| ·淋巴细胞的提取和纯化 | 第22-23页 |
| ·总 RNA提取 | 第23页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增重链(Fd)和轻链基因 | 第24-26页 |
| ·PCR扩增重链 Fd和轻链基因 | 第26页 |
| ·重链 Fd和轻链 PCR产物的纯化回收 | 第26页 |
| ·感受态大肠杆菌 XL1-Blue的制备 | 第26页 |
| ·电转化 | 第26-27页 |
| ·噬粒 p3MH的扩增、提取和纯化 | 第27页 |
| ·轻链库(p3MH-L)的构建及鉴定 | 第27-29页 |
| ·噬菌体抗体库的构建 | 第29-31页 |
| ·辅助噬菌体 VCSM13的扩增和滴度测定 | 第31页 |
| ·Fab噬菌体抗体库的鉴定 | 第31页 |
| ·Fab噬菌体抗体库多样性分析 | 第31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-43页 |
| ·提取外周血淋巴细胞总 RNA | 第31-32页 |
| ·逆转录生成cDNA | 第32页 |
| ·PCR扩增重链 Fd和轻链 | 第32-35页 |
| ·轻链库的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| ·噬菌体抗体库的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| ·抗体库多样性分析 | 第37-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| ·实验鱼类的选择 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43-44页 |
| ·电转化效率 | 第44页 |
| ·斑点叉尾鮰免疫球蛋白基因结构分析 | 第44-45页 |
| ·斑点叉尾鮰免疫球蛋白重链基因分析 | 第44-45页 |
| ·斑点叉尾鮰免疫球蛋白轻链基因分析 | 第45页 |
| 6 结论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
