| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 第一章 文献回顾 | 第11-26页 |
| 1 CYP450的研究进展 | 第11-16页 |
| ·CYP450系统的命名 | 第11页 |
| ·CYP450系统的分类 | 第11页 |
| ·CYP450系统的分布 | 第11页 |
| ·CYP450系统的结构特征 | 第11-12页 |
| ·CYP450系统的循环催化机制 | 第12页 |
| ·CYP450系统的功能 | 第12-14页 |
| ·CYP450与外源物质代谢 | 第13页 |
| ·CYP450与固醇类激素的生物合成 | 第13页 |
| ·其他功能 | 第13-14页 |
| ·CYP450与药物代谢 | 第14-16页 |
| ·CYP450在药物代谢中的作用 | 第14页 |
| ·CYP450与药物相互作用 | 第14-16页 |
| ·CYP450与新药研发 | 第16页 |
| ·CYP450与癌症发生 | 第16页 |
| 2 CYP1A2的研究进展 | 第16-23页 |
| ·概述 | 第16-17页 |
| ·CYP1A2的基因结构 | 第17页 |
| ·CYP1A2的基因多态性 | 第17-18页 |
| ·CYP1A2与外源物质代谢 | 第18-20页 |
| ·CYP1A2与致癌物质代谢 | 第18-19页 |
| ·CYP1A2与药物代谢 | 第19-20页 |
| ·CYP1A2的诱导与抑制 | 第20-21页 |
| ·诱导 | 第20-21页 |
| ·抑制 | 第21页 |
| ·CYP1A2与黄酮类化合物 | 第21-22页 |
| ·CYP1A2与抗抑郁药相关的药物相互作用 | 第22-23页 |
| ·抗抑郁药物概述 | 第22-23页 |
| ·CYP1A2与抗抑郁药相关的药物相互作用 | 第23页 |
| 3 CYP2E1的研究进展 | 第23-26页 |
| ·概述 | 第23-24页 |
| ·CYP2E1的基因多态性 | 第24页 |
| ·CYP2E1的诱导与抑制 | 第24页 |
| ·CYP2E1与药物代谢 | 第24-26页 |
| 第二章 人CYP1A2与CYP2E1野生型酵母表达系统 | 第26-42页 |
| 1 材料与仪器 | 第26-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要培养基 | 第27-29页 |
| ·用于重组大肠杆菌培养 | 第27-28页 |
| ·用于重组酿酒酵母培养 | 第28-29页 |
| ·主要溶液(主要用于转化和鉴定) | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-37页 |
| ·pYES2/CT-CYP1A2/pYES2/CT-CYP2E1重组大肠杆菌的构建及鉴定 | 第30-33页 |
| ·CYP1A2/CYP2E1基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·表达载体pYES2/CT的制备 | 第32页 |
| ·野生型cDNA与表达载体pYES2/CT的双酶切及其纯化 | 第32页 |
| ·野生型cDNA与表达载体pYES2/CT的连接 | 第32-33页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第33页 |
| ·TOP10感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·重组菌株的构建(化学转化) | 第33页 |
| ·阳性克隆的鉴定与测序 | 第33页 |
| ·重组酵母菌株的构建,表达和鉴定 | 第33-36页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·重组酵母菌株的构建(电转化法和营养缺陷型筛选法) | 第34页 |
| ·重组酵母菌株的小量诱导表达 | 第34页 |
| ·酵母菌体的小量裂解 | 第34页 |
| ·Western blotting鉴定目的蛋白表达 | 第34-36页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·Western blotting | 第35-36页 |
| ·保存菌种 | 第36页 |
| ·酵母微粒体的制备和鉴定 | 第36-37页 |
| ·大量诱导表达条件的优化 | 第36页 |
| ·差速离心法制备酵母微粒体 | 第36页 |
| ·微粒体蛋白浓度测定 | 第36页 |
| ·微粒体中CYP1A2含量的测定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-39页 |
| ·pYES2/CT-CYP1A2与pYES2/CT-CYP2E1重组大肠杆菌的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·CYP1A2/CYP2E1基因的扩增 | 第37页 |
| ·重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·Western blotting鉴定CYP1A2/CYP2E1野生型目的蛋白表达 | 第38页 |
| ·酵母微粒体的制备和鉴定 | 第38-39页 |
| ·酵母微粒体蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·微粒体中CYP1A2含量的测定 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| ·异源表达CYPs的应用 | 第39-40页 |
| ·异源表达系统的选择 | 第40页 |
| ·表达产物分析 | 第40-42页 |
| 第三章 CYP1A2荧光药物筛选平台的建立 | 第42-53页 |
| 1 材料与仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要溶液 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·选用药物 | 第43页 |
| ·特异性抑制实验选用抑制剂 | 第43页 |
| ·药物筛选实验选取的抗抑郁药物 | 第43页 |
| 2 实验 | 第43-46页 |
| ·酶活性检测 | 第43-44页 |
| ·酶促反应条件的优化与确定 | 第44页 |
| ·反应时间线性的确定 | 第44页 |
| ·酶浓度线性的确定 | 第44页 |
| ·CHC标准曲线的建立 | 第44页 |
| ·酶动力学分析 | 第44-45页 |
| ·药物抑制实验 | 第45-46页 |
| ·特异性抑制剂苯并黄酮对重组人CYP1A2野生株的抑制实验 | 第45页 |
| ·特异性抑制实验 | 第45页 |
| ·抗抑郁药物抑制实验 | 第45-46页 |
| ·数据分析 | 第46页 |
| ·计算IC50值 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-50页 |
| ·微粒体酶活性鉴定 | 第46页 |
| ·酶促反应条件的优化与确定 | 第46-48页 |
| ·反应时间线性的确定 | 第47页 |
| ·反应酶浓度线性 | 第47-48页 |
| ·CHC标准曲线的建立 | 第48页 |
| ·酶动力学分析 | 第48-49页 |
| ·药物抑制实验 | 第49-50页 |
| ·苯并黄酮对重组人CYP1A2野生株的抑制实验 | 第49页 |
| ·特异性抑制实验 | 第49-50页 |
| ·抗抑郁药物筛选实验 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·检测系统的选择 | 第50-51页 |
| ·特异性抑制剂的选择 | 第51页 |
| ·特异性抑制实验 | 第51页 |
| ·抗抑郁药药物筛选实验 | 第51-53页 |
| 全文小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
