| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-28页 |
| ·金黄色葡萄球菌 | 第10-15页 |
| ·金黄色葡萄球菌的分类及基本特征 | 第10页 |
| ·金黄色葡萄球菌的致病性 | 第10-11页 |
| ·金黄色葡萄球菌的主要致病因子 | 第11-13页 |
| ·耐氧甲西林金黄色葡萄球菌 | 第13页 |
| ·金黄色葡萄球菌的基因组测序 | 第13-14页 |
| ·金黄色葡萄球菌中的σ因子 | 第14-15页 |
| ·温和噬菌体的生活周期 | 第15-22页 |
| ·噬菌体策略 | 第15-16页 |
| ·噬菌体的裂解周期受级联反应控制 | 第16-17页 |
| ·温和噬菌体的裂解周期 | 第17-18页 |
| ·温和噬菌体的溶源化过程 | 第18-20页 |
| ·噬菌体在宿主染色体中插入和切出的模型 | 第20-22页 |
| ·金黄色葡萄球菌中的原噬菌体 | 第22-28页 |
| ·可动遗传因子 | 第22-23页 |
| ·原噬菌体 | 第23-24页 |
| ·温和噬菌体的水平转移机制 | 第24-25页 |
| ·原噬菌体与宿主的协同进化 | 第25-28页 |
| 第2章 实验结果 | 第28-48页 |
| ·金黄色葡萄球菌原噬菌体int基因的5’非转录区有一个启动子 | 第28-33页 |
| ·金黄色葡萄球菌原噬菌体int基因的上游存在着一个高度保守的区域 | 第28-32页 |
| ·金黄色葡萄球菌元噬菌体int基因转录结构分析 | 第32-33页 |
| ·金黄色葡萄球菌σ因子σ~H识别int基因前的启动子并起始转录 | 第33-44页 |
| ·金黄色葡萄球菌的σ~H在进化上有别与其它厚壁菌门的成员 | 第34页 |
| ·SigH基因的缺失引起了原噬菌体int基因mRNA水平的下降 | 第34-35页 |
| ·Northern实验证明sigH敲除株中缺少了最短的一条int基因转录产物 | 第35-38页 |
| ·σ~H蛋白在体内和体外都可以识别int基因的启动子并起始转录 | 第38-40页 |
| ·相对于野生型,SigH基因缺失株中的原噬菌体游离态有所增加 | 第40-44页 |
| ·SigH基因的缺失改变了金黄色葡萄球菌的自发裂解率和溶源率 | 第44-48页 |
| ·SigH基因的缺失提高了金黄色葡萄球菌的自发裂解率 | 第44-45页 |
| ·SigH基因的缺失降低了金黄色葡萄球菌的溶源率 | 第45-48页 |
| 第3章 结果讨论 | 第48-52页 |
| 第4章 材料与方法 | 第52-78页 |
| ·菌株及培养 | 第52-53页 |
| ·质粒的构建 | 第53-62页 |
| ·引物的设计和PCR | 第54-58页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2感受态细胞的制备 | 第58-59页 |
| ·酶切反应 | 第59-60页 |
| ·线形质粒DNA的去磷化 | 第60页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA片断的回收 | 第60-61页 |
| ·DNA的连接反应 | 第61页 |
| ·大肠杆菌质粒的热激转化 | 第61页 |
| ·碱裂解法快速小量质粒抽提 | 第61-62页 |
| ·大肠杆菌系统表达中蛋白质的表达和纯化 | 第62-64页 |
| ·大肠杆菌表达系统中的蛋白诱导表达 | 第62页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)蛋白电泳 | 第62-63页 |
| ·Ni-NTA树脂纯化带有6-histidin Tag的蛋白 | 第63-64页 |
| ·同源重组法构建金黄色葡萄球菌的基因缺失株 | 第64-66页 |
| ·金黄色葡萄球菌电转感受态制备方法 | 第64页 |
| ·金黄色葡萄球菌的电转化法 | 第64-65页 |
| ·金黄色葡萄球菌的质粒抽提 | 第65页 |
| ·用pMAD质粒对金黄色葡萄球菌基因组进行基因敲除 | 第65-66页 |
| ·基因组DNA及全RNA的抽提 | 第66-68页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的抽提 | 第66-67页 |
| ·金黄色葡萄球菌的总RNA抽提(Trizol法) | 第67-68页 |
| ·用DNA酶消化提取RNA中残余的DNA污染 | 第68页 |
| ·反转录 | 第68-69页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第69-70页 |
| ·体外转录 | 第70-71页 |
| ·Northern印迹 | 第71-72页 |
| ·引物延伸实验 | 第72-73页 |
| ·大肠杆菌体内σ~H-pint识别实验 | 第73-74页 |
| ·在大肠杆菌基因组上插入pint-lacZ融合片断 | 第73页 |
| ·β-内酰胺酶酶活的测定 | 第73-74页 |
| ·噬菌体的紫外诱导及病毒粒子的滴度测定 | 第74-75页 |
| ·溶源菌株的构建 | 第75-76页 |
| ·丝裂霉素C诱导溶源菌裂解 | 第75页 |
| ·用PEG沉淀噬菌体颗粒 | 第75页 |
| ·构建溶源菌株 | 第75-76页 |
| ·溶源率测定实验 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录1 缩略词表 | 第88-89页 |
| 附录2 序列号表 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第92-93页 |
