| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-20页 |
| ·葡萄糖氧化酶的催化反应机制 | 第8页 |
| ·葡萄糖氧化酶的生化特点 | 第8-9页 |
| ·葡萄糖氧化酶的来源 | 第9-10页 |
| ·葡萄糖氧化酶的应用 | 第10-12页 |
| ·葡萄糖氧化酶在食品工业中的应用 | 第10-11页 |
| ·葡萄糖氧化酶在饲料行业中的应用 | 第11页 |
| ·葡萄糖氧化酶在医药行业中的应用 | 第11页 |
| ·葡萄糖氧化酶在纺织工业中的应用 | 第11-12页 |
| ·葡萄糖氧化酶活力的测定方法 | 第12页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第12-13页 |
| ·表达载体 | 第13页 |
| ·宿主菌株 | 第13页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第13-15页 |
| ·外源基因的特点 | 第14页 |
| ·基因剂量 | 第14页 |
| ·信号肽选择 | 第14-15页 |
| ·翻译后修饰 | 第15页 |
| ·发酵培养条件 | 第15页 |
| ·提高外源蛋白表达量的策略 | 第15-18页 |
| ·密码子优化 | 第15-16页 |
| ·MRNA结构改造 | 第16页 |
| ·GC含量调整 | 第16页 |
| ·表达方式优化 | 第16-17页 |
| ·发酵条件的优化 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 葡萄糖氧化酶基因的优化设计及合成 | 第20-32页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·工具酶 | 第20页 |
| ·培养基和试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·葡萄糖氧化酶原始基因分析 | 第21页 |
| ·葡萄糖氧化酶基因优化设计 | 第21页 |
| ·密码子优化后的葡萄糖氧化酶(GOD-M)基因合成 | 第21-25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·葡萄糖氧化酶原始基因分析 | 第25-26页 |
| ·葡萄糖氧化酶基因的优化设计 | 第26-27页 |
| ·GOD-M全长的拼接和测序 | 第27-29页 |
| ·讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 葡萄糖氧化酶重组毕赤酵母菌株的构建和筛选 | 第32-44页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·工具酶和试剂 | 第32页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·葡萄糖氧化酶重组表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母GS115电击感受态制备 | 第34-35页 |
| ·PPIC9-GOD-M质粒线性化 | 第35页 |
| ·线性化质粒电击转化毕赤酵母 | 第35-36页 |
| ·葡萄糖氧化酶酶活测定方法 | 第36页 |
| ·转化子初筛 | 第36-38页 |
| ·实验结果 | 第38-42页 |
| ·葡萄糖氧化酶重组表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·PPIC9-GOD-M质粒线性化 | 第39-40页 |
| ·电击转化毕赤酵母 | 第40页 |
| ·葡萄糖氧化酶酶活测定 | 第40-41页 |
| ·重组子初筛 | 第41-42页 |
| ·葡萄糖氧化酶重组毕赤酵母复筛 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 葡萄糖氧化酶的表达和酶学性质测定 | 第44-54页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·重组毕赤酵母的发酵 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白表达情况 | 第45页 |
| ·葡萄糖氧化酶酶学性质测定 | 第45-47页 |
| ·实验结果 | 第47-51页 |
| ·葡萄糖氧化酶重组毕赤酵母发酵 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第47-48页 |
| ·葡萄糖氧化酶酶学性质 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| 全文结论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |