| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一部分 | 第10-17页 |
| 1 李斯特菌概述 | 第11页 |
| 2 单增李斯特菌感染机制 | 第11页 |
| 3 穿孔毒素概述 | 第11-14页 |
| 3.1 胆固醇依赖性胞质溶素概述 | 第12-13页 |
| 3.2 溶血素O研究进展 | 第13-14页 |
| 4 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号级联反应及其激活概述 | 第14-17页 |
| 4.1 MAPKs协助机体抗细菌感染简述 | 第15页 |
| 4.2 病原体对MAPK信号传导的调节 | 第15-17页 |
| 第二部分 | 第17-55页 |
| 第一章 单增李斯特菌感染依赖LLO介导ERK1/2 磷酸化的研究 | 第18-26页 |
| 1 材料与方法 | 第18-23页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第18页 |
| 1.2 细胞及培养条件 | 第18页 |
| 1.3 试剂及仪器 | 第18-20页 |
| 1.4 试剂配制 | 第20-21页 |
| 1.5 重组蛋白LLO的表达纯化及透析 | 第21-22页 |
| 1.6 单增李斯特菌的Caco-2 细胞感染试验 | 第22页 |
| 1.7 单增李斯特菌LLO蛋白处理Caco-2 细胞试验 | 第22页 |
| 1.8 ERK1/2 蛋白磷酸化的Western blot分析 | 第22-23页 |
| 2 试验结果 | 第23-25页 |
| 2.1 单增李斯特菌感染Caco-2 细胞活化ERK1/2 蛋白分析 | 第23-24页 |
| 2.2 重组蛋白LLO处理Caco-2 细胞活化ERK1/2 蛋白分析 | 第24-25页 |
| 3 讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 单增李斯特菌LLO激活ERK1/2 磷酸化不依赖其PEST序列 | 第26-38页 |
| 1 材料与方法 | 第26-34页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第26页 |
| 1.2 细胞及培养条件 | 第26-27页 |
| 1.3 试剂订购 | 第27页 |
| 1.4 试验仪器 | 第27-28页 |
| 1.5 试剂配制 | 第28页 |
| 1.6 E.coli感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 1.7 EGD-e基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 1.8 LLO缺失PEST序列的重组蛋白LLOΔPEST的构建 | 第29-31页 |
| 1.9 LLO及其PEST序列缺失蛋白的表达与纯化 | 第31页 |
| 1.10 重组蛋白溶血活性检测 | 第31-32页 |
| 1.11 碘化丙啶细胞染色试验 | 第32页 |
| 1.12 单增李斯特菌LLO蛋白处理Caco-2 细胞试验 | 第32页 |
| 1.13 ERK1/2 蛋白磷酸化的Western blot分析 | 第32-34页 |
| 2 试验结果 | 第34-36页 |
| 2.1 PEST序列不影响LLO激活ERK1/2 磷酸化 | 第34页 |
| 2.2 LLO对细胞膜的裂解能力与其含量成正比 | 第34-35页 |
| 2.3 胆固醇抑制LLO激活ERK1/2 磷酸化 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 单增李斯特菌LLO激活ERK1/2 磷酸化依赖其膜裂解功能研究 | 第38-48页 |
| 1 材料与方法 | 第38-43页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第38页 |
| 1.2 细胞及培养条件 | 第38页 |
| 1.3 试剂订购 | 第38页 |
| 1.4 试验仪器 | 第38页 |
| 1.5 试剂配制 | 第38-40页 |
| 1.6 LLO T515L516 位点双突变的重组蛋白的构建 | 第40页 |
| 1.7 缺失hly的单增李斯特菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 1.8 hly回补突变株的构建 | 第40页 |
| 1.9 单增李斯特菌回补质粒电转程序 | 第40-41页 |
| 1.10 LLO及其突变蛋白的表达纯化与透析 | 第41页 |
| 1.11 重组蛋白溶血活性检测 | 第41页 |
| 1.12 单增李斯特菌hly突变株蛋白表达水平验证 | 第41-42页 |
| 1.13 单增李斯特菌的溶血活性检测 | 第42页 |
| 1.14 单增李斯特菌hly各突变株的体外生长曲线测定 | 第42页 |
| 1.15 碘化丙啶细胞染色试验 | 第42页 |
| 1.16 单增李斯特菌感染Caco-2 细胞试验 | 第42页 |
| 1.17 单增李斯特菌LLO蛋白处理Caco-2 细胞试验 | 第42页 |
| 1.18 Western blot试验 | 第42-43页 |
| 2 试验结果 | 第43-46页 |
| 2.1 LLO_(T515AL516A)丧失溶血活性 | 第43页 |
| 2.2 LLO的膜裂解活性影响其激活ERK1/2 磷酸化 | 第43-45页 |
| 2.3 李斯特菌突变株CΔhly_(T515AL516A)不能激活ERK1/2 磷酸化 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 单增李斯特菌介导ERK1/2 磷酸化与其感染能力相关 | 第48-55页 |
| 1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 1.1 菌株及培养条件 | 第48页 |
| 1.2 细胞种类及培养条件 | 第48页 |
| 1.3 试剂购买 | 第48页 |
| 1.4 空斑试验 | 第48-49页 |
| 1.5 细菌毒性试验 | 第49-50页 |
| 1.6 细菌的胞内增殖试验 | 第50-51页 |
| 1.7 细菌的小鼠体内脏器增殖试验 | 第51页 |
| 2 试验结果 | 第51-54页 |
| 2.1 单增李斯特菌突变株CΔhly_(T515AL516A)胞间扩散能力减弱 | 第51页 |
| 2.2 单增李斯特菌突变株CΔhly_(T515AL516A)胞内增殖能力减弱 | 第51页 |
| 2.3 单增李斯特菌突变株CΔhly_(T515AL516A)小鼠体内脏器增殖能力减弱 | 第51-52页 |
| 2.4 单增李斯特菌突变株CΔhly_(T515AL516A)具有细胞毒性 | 第52-54页 |
| 3 讨论 | 第54-55页 |
| 第三部分 | 第55-57页 |
| 结论与展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录1 中英文对照表 | 第62-63页 |
| 附录2 试验所需引物 | 第63-64页 |
| 个人简历 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
