| 中文摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第10-18页 |
| 前言 | 第18-21页 |
| 第一篇 文献综述 | 第21-60页 |
| 第一章 禽流感病原学及流行病学研究进展 | 第21-42页 |
| 1 流感病毒概述 | 第21-23页 |
| ·流感病毒的分类 | 第21-22页 |
| ·流感病毒的形态与结构 | 第22-23页 |
| 2 禽流感病毒病原学特点 | 第23-35页 |
| ·AIV的分类与命名 | 第23-24页 |
| ·AIV的理化特性 | 第24页 |
| ·AIV的基因组及其编码蛋白质 | 第24-35页 |
| ·血凝素基因及其编码的蛋白质 | 第25-27页 |
| ·NA基因及其编码的神经氨酸酶 | 第27-28页 |
| ·编码核衣壳蛋白基因及核蛋白 | 第28-29页 |
| ·M基因及编码的基质蛋白 | 第29-30页 |
| ·其他基因片段及编码蛋白 | 第30-32页 |
| ·AIV的复制分子机制与基因遗传变异性 | 第32-35页 |
| 3 H5N1亚型禽流感流行现状 | 第35-40页 |
| ·H5N1禽流感在禽类中流行现状 | 第35-37页 |
| ·H5N1禽流感病毒在候鸟中的流行 | 第37页 |
| ·H5N1禽流感病毒对哺乳动物的感染 | 第37-38页 |
| ·H5N1禽流感病毒对人的感染 | 第38-40页 |
| 4 H5N1亚型流感病毒的进化 | 第40-41页 |
| 5 结语 | 第41-42页 |
| 第二章 核酸疫苗研究进展 | 第42-53页 |
| 1 核酸疫苗概述 | 第42-43页 |
| 2 核酸疫苗的发展简史 | 第43-44页 |
| 3 核酸疫苗的免疫机理 | 第44-46页 |
| 4 增强核酸疫苗免疫效果的方法 | 第46-49页 |
| ·目的基因的选择 | 第46页 |
| ·构建高效表达的重组质粒 | 第46-47页 |
| ·接种组织的预处理 | 第47页 |
| ·免疫途径、免疫剂量和免疫次数 | 第47-48页 |
| ·免疫增强剂和佐剂 | 第48-49页 |
| 5 核酸疫苗在畜禽领域的研究进展 | 第49-52页 |
| 6 核酸疫苗存在的问题与展望 | 第52-53页 |
| 第三章 犬腺病毒载体的研究进展 | 第53-60页 |
| 1 CAV分子生物学特征 | 第53-55页 |
| 2 CAV载体的研究进展 | 第55-60页 |
| ·腺病毒载体的优点 | 第55页 |
| ·腺病毒载体的构建 | 第55-56页 |
| ·犬腺病毒载体 | 第56-60页 |
| ·基因组中的外源基因插入位点 | 第57页 |
| ·构建方法与策略 | 第57-60页 |
| 第二篇 研究内容 | 第60-115页 |
| 第一章 虎源H5N1亚型流感病毒HA与NP基因的克隆、测序及其核酸疫苗的构建 | 第60-81页 |
| 1 材料与方法 | 第61-69页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·毒株、细胞、工程细菌和质粒 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-69页 |
| ·感受态菌的制备(CaCl_2转化法) | 第61-62页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第62页 |
| ·质粒DNA的大量制备(碱裂解法) | 第62-63页 |
| ·连接物的转化 | 第63页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第63页 |
| ·总RNA的提取 | 第63页 |
| ·HA和NP基因的扩增、克隆及测序 | 第63-64页 |
| ·核酸疫苗真核表达载体pVAX-HA和pVAX-NP的构建 | 第64-65页 |
| ·核酸疫苗真核表达载体pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP的构建 | 第65-68页 |
| ·所构建的四种真核表达质粒在真核细胞中的表达及检测 | 第68-69页 |
| 2 结果 | 第69-78页 |
| ·A/TIGER/HARBIN/132/2007 (H5N1) HA和NP基因的PCR扩增、克隆和测序分析 | 第69-72页 |
| ·PVAX-HA和PVAX-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第72-73页 |
| ·PIRES2-IL-18-HA和PIRES2-IL-18-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第73-75页 |
| ·猫IL-18基因的PCR扩增、克隆和测序分析 | 第73-74页 |
| ·pIRES2-IL-18载体的构建及鉴定 | 第74页 |
| ·pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第74-75页 |
| ·所构建的四种真核表达质粒在BHK-21细胞中的表达和检测 | 第75-78页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第75-76页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第76-77页 |
| ·猫IL-18基因在真核细胞中的表达检测结果 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| ·目的基因的选择 | 第78-79页 |
| ·毒株的选择 | 第79页 |
| ·核酸疫苗表达载体的选择 | 第79-80页 |
| 4 小结 | 第80-81页 |
| 第二章 表达虎源H5N1流感病毒NP和HA蛋白重组犬2型腺病毒的构建与鉴定 | 第81-95页 |
| 1 材料与方法 | 第82-86页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·病毒、细胞、细菌和质粒 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·DNA片段末端平滑化 | 第82页 |
| ·线性化质粒DNA片段5'末端去磷酸化 | 第82页 |
| ·H5N1 NP和HA表达盒转移载体的构建 | 第82-83页 |
| ·含H5N1 NP和H5N1 HA表达盒CAV-2基因组重组质粒的构建 | 第83-84页 |
| ·重组质粒pCAV-2-NP和pCAV-2-HA基因组转染DK细胞 | 第84-85页 |
| ·CAV-2-NP和CAV-2-HA的鉴定 | 第85-86页 |
| 2 结果 | 第86-92页 |
| ·H5N1 NP与HA表达盒转移载体的构建 | 第86-87页 |
| ·含H5N1 NP和HA表达盒CAV-2基因组重组质粒的构建 | 第87-88页 |
| ·重组PCAV-2-NP与PCAV-2-HA基因组转染DK细胞 | 第88-89页 |
| ·CAV-2-NP与CAV-2-HA的鉴定 | 第89-92页 |
| 3 讨论 | 第92-94页 |
| ·CAV-2载体的选择 | 第92页 |
| ·E3区缺失载体及H5N1 NP和HA表达盒转移载体的构建 | 第92-93页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第93页 |
| ·H5N1 NP和HA基因的转录与表达 | 第93页 |
| ·重组病毒的生长特性 | 第93页 |
| ·重组病毒的遗传稳定性 | 第93-94页 |
| 4 小结 | 第94-95页 |
| 第三章 核酸疫苗与重组活载体疫苗的小鼠免疫与攻毒保护性试验 | 第95-113页 |
| 实验一 核酸疫苗的小鼠免疫与攻毒保护性试验 | 第95-104页 |
| 1 材料与方法 | 第96-98页 |
| ·材料 | 第96页 |
| ·毒株与质粒 | 第96页 |
| ·实验动物及主要试剂 | 第96页 |
| ·方法 | 第96-98页 |
| ·pVAX-HA、pVAX-NP、pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP的制备 | 第96页 |
| ·小鼠分组与免疫 | 第96-97页 |
| ·攻毒 | 第97页 |
| ·免疫小鼠血清抗AIV抗体的检测 | 第97-98页 |
| 2 结果 | 第98-101页 |
| ·抗AIV抗体水平检测结果 | 第98页 |
| ·抗AIV ELISA抗体水平检测结果 | 第98页 |
| ·抗AIV HI抗体检测结果 | 第98页 |
| ·免疫小鼠的脾淋巴细胞转化试验检测结果 | 第98-99页 |
| ·攻毒保护性试验结果 | 第99-101页 |
| ·攻毒后的临床表现 | 第99-100页 |
| ·核酸疫苗保护率结果 | 第100-101页 |
| 3 讨论 | 第101-103页 |
| ·AIV核酸疫苗的免疫效果分析 | 第101-103页 |
| ·不同载体的核酸疫苗免疫效果的差异 | 第101页 |
| ·不同目的基因核酸疫苗免疫效果的差异 | 第101-102页 |
| ·联合免疫与单独免疫效果的差异 | 第102页 |
| ·关于HI试验结果 | 第102页 |
| ·核酸疫苗免疫效果的总体评价 | 第102-103页 |
| ·免疫实验总结与后续工作展望 | 第103页 |
| 4 小结 | 第103-104页 |
| 实验二 重组活载体疫苗的小鼠免疫与攻毒保护试验 | 第104-113页 |
| 1 材料与方法 | 第104-106页 |
| ·材料 | 第104-105页 |
| ·毒株与疫苗 | 第104-105页 |
| ·实验动物及主要试剂 | 第105页 |
| ·方法 | 第105-106页 |
| ·小鼠分组与免疫方法 | 第105页 |
| ·小鼠体重变化监测 | 第105页 |
| ·攻毒保护实验 | 第105页 |
| ·攻毒后肺滴度的测定 | 第105-106页 |
| ·免疫小鼠血清抗AIV抗体的检测 | 第106页 |
| 2 结果 | 第106-110页 |
| ·免疫后小鼠体重变化 | 第106-107页 |
| ·抗AIV抗体水平检测结果 | 第107-108页 |
| ·抗AIV ELISA抗体水平检测结果 | 第107-108页 |
| ·抗AIV HI抗体检测结果 | 第108页 |
| ·攻毒保护性试验结果 | 第108-110页 |
| 3 讨论 | 第110-112页 |
| ·免疫对小鼠体重的变化 | 第110页 |
| ·重组活载体疫苗抗体水平结果分析 | 第110-111页 |
| ·不同目的基因重组活载体疫苗免疫效果的差异 | 第111页 |
| ·联合免疫与单独免疫效果的差异 | 第111页 |
| ·关于HI试验结果 | 第111页 |
| ·重组活载体疫苗免疫效果的总体评价 | 第111-112页 |
| 4 小结 | 第112-113页 |
| 第四章 结论 | 第113-114页 |
| 第五章 创新点 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 攻毒学位期间发表的学术论文和出版教材 | 第127页 |
