| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 microRNA(miRNA)与肿瘤关系及其研究方法进展 | 第12-22页 |
| ·miRNA与肿瘤 | 第12-15页 |
| ·miRNA的生物合成与作用机制 | 第12-13页 |
| ·miRNA与肿瘤发生 | 第13页 |
| ·miRNA与肿瘤细胞增殖凋亡 | 第13-14页 |
| ·miRNA与肿瘤细胞侵袭转移 | 第14页 |
| ·miRNA与肿瘤细胞耐药性 | 第14-15页 |
| ·miRNA与肿瘤预后 | 第15页 |
| ·miRNA靶基因鉴定 | 第15-17页 |
| ·miRNA靶基因预测 | 第15-16页 |
| ·miRNA靶基因验证 | 第16-17页 |
| ·miRNA表达谱分析 | 第17-21页 |
| ·肿瘤miRNA表达差异的可能原因 | 第17-18页 |
| ·miRNA表达谱与肿瘤鉴定 | 第18页 |
| ·miRNA表达谱分析方法 | 第18-21页 |
| ·研究目标与意义 | 第21-22页 |
| 2 CCND1基因靶向miRNA的预测与双荧光素酶报告基因系统验证 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·miRNA真核表达载体构建 | 第23-25页 |
| ·荧光素酶报告基因载体Luc-CCND1-3'-UTR构建 | 第25页 |
| ·DNA转染 | 第25页 |
| ·miRNA表达的实时荧光定量RT-PCR检测 | 第25-26页 |
| ·CCND1基因预测靶向miRNA的双荧光素酶报告基因系统检测 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-28页 |
| ·miRNA真核表达载体构建 | 第26页 |
| ·荧光素酶报告基因载体Luc-CCND1-3'-UTR构建 | 第26-28页 |
| ·CCND1基因靶向miRNA筛选 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| 3 CCND1基因靶向miRNA的系统验证 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·CCND1蛋白的Western杂交分析 | 第32页 |
| ·CCND1 mRNA表达的实时荧光定量RT-PCR检测 | 第32页 |
| ·miR-503靶位点敲除荧光素酶报告基因载体Luc-CCND1-3'-UTR-2-d构建 | 第32-33页 |
| ·RNA转染 | 第33页 |
| ·靶向miRNA特异性与靶位点的双荧光素酶报告基因系统检测 | 第33页 |
| ·细胞周期检测 | 第33-34页 |
| ·细胞生长检测 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·CCND1蛋白和mRNA检测 | 第35页 |
| ·miR-503靶位点敲除荧光素酶报告基因载体构建 | 第35页 |
| ·miR-503作用特异性和靶位点检测 | 第35页 |
| ·miR-503对细胞周期和细胞生长影响检测 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 4 西洋参提取物处理人乳腺癌细胞的miRNA表达谱分析 | 第38-42页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·细胞 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-39页 |
| ·西洋参提取物处理浓度和时间确定 | 第38页 |
| ·西洋参提取物处理及样品RNA提取与逆转录 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量PCR阵列检测miRNA表达谱 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·西洋参提取物处理浓度和时间确定 | 第39页 |
| ·西洋参提取物处理miRNA表达谱检测 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 5 球孢白僵菌芽生孢子转化体系的优化 | 第42-48页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第42-43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·感受态芽生孢子的制备 | 第43页 |
| ·REMI介导 | 第43页 |
| ·电击 | 第43-44页 |
| ·转化子稳定性测试 | 第44页 |
| ·转化子基因组DNA提取 | 第44页 |
| ·转化子PCR鉴定 | 第44页 |
| ·转化子Southern杂交鉴定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-47页 |
| ·REMI转化条件优化 | 第45-46页 |
| ·电击转化条件优化 | 第46页 |
| ·转化子中bar基因检测 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 6 结语 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-60页 |
| Summary | 第60-63页 |
| 附录:攻读学位期间的主要成果 | 第63页 |
