| 致谢 | 第1-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-36页 |
| ·工业微生物的遗传育种 | 第17-29页 |
| ·引言 | 第17-18页 |
| ·基因代谢网络的育种策略 | 第18-24页 |
| ·单一基因操作的育种 | 第19-20页 |
| ·代谢网络工程的育种 | 第20-24页 |
| ·细胞水平的全基因组育种策略 | 第24-28页 |
| ·自然选育与随机诱变 | 第25-26页 |
| ·杂交与融合育种技术 | 第26页 |
| ·全基因组定向进化 | 第26-27页 |
| ·全基因组重排 | 第27-28页 |
| ·小结 | 第28-29页 |
| ·应用于酵母遗传操作的标记 | 第29-34页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第29-30页 |
| ·抗性标记 | 第30-31页 |
| ·细胞学标记 | 第31-32页 |
| ·分子标记 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| ·本工作研究目的与研究内容 | 第34-36页 |
| 第二章 工业酿酒酵母出发菌株的筛选 | 第36-46页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·实验试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·培养基的配制 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·发酵性能测定 | 第39-40页 |
| ·发酵工艺流程 | 第39-40页 |
| ·发酵产物分析 | 第40页 |
| ·酵母单倍体分离与鉴定 | 第40-41页 |
| ·诱导孢子形成的方法 | 第40页 |
| ·子囊孢子的分离和单倍体的获得 | 第40页 |
| ·酵母单倍体的鉴定 | 第40-41页 |
| ·单倍体交配型鉴定 | 第41页 |
| ·酵母单倍体杂交与鉴定 | 第41页 |
| ·单倍体的杂交 | 第41页 |
| ·重组子的鉴定 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·酿酒酵母菌株单倍体的分离与鉴定 | 第41-43页 |
| ·酿酒酵母菌株单倍体的分离 | 第41-42页 |
| ·单倍体发酵性能测定及交配型鉴定 | 第42-43页 |
| ·杂交获得优良酵母重组子 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 利用RAPD-SCAR分子标记筛选细胞融合重组子 | 第46-72页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·材料 | 第46-51页 |
| ·菌株 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·实验试剂的配制 | 第47-50页 |
| ·酵母基因组DNA提取主要试剂 | 第47-48页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第48页 |
| ·原生质体制备与电融合所用试剂 | 第48-49页 |
| ·脉冲场凝胶电泳(PFGE)所用试剂 | 第49-50页 |
| ·培养基的配制 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-58页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第51页 |
| ·RAPD反应分析 | 第51-53页 |
| ·RAPD引物 | 第51-52页 |
| ·RAPD扩增 | 第52-53页 |
| ·目的条带的回收与TA克隆 | 第53-55页 |
| ·目的条带的割胶回收 | 第53页 |
| ·目的条带与T载体的连接 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第54页 |
| ·菌落PCR挑选转化子 | 第54-55页 |
| ·特异序列片段扩增(SCAR)引物的设计 | 第55页 |
| ·原生质体的制备与电融合 | 第55-57页 |
| ·原生质体制备 | 第55-56页 |
| ·原生质体再生 | 第56-57页 |
| ·原生质体电融合 | 第57页 |
| ·脉冲场凝胶电泳(PFGE)对酵母核型的分析 | 第57-58页 |
| ·酵母菌染色体DNA样品制备 | 第57-58页 |
| ·脉冲场凝胶电泳(PFGE) | 第58页 |
| ·结果 | 第58-69页 |
| ·菌株Z8和Z9的RAPD分析 | 第58-60页 |
| ·RAPD-SCAR分子标记转化 | 第60-61页 |
| ·原生质体的制备与电融合 | 第61-63页 |
| ·原生质体制备条件优化 | 第61-63页 |
| ·原生质体的电融合 | 第63页 |
| ·Z8和Z9重组子的检测 | 第63-66页 |
| ·SCAR分子标记筛选杂合重组子 | 第63-64页 |
| ·杂合重组子的验证 | 第64-66页 |
| ·重组子与亲株发酵性能的比较 | 第66-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| ·分子标记在工业菌株中的应用 | 第69页 |
| ·RAPD标记到SCAR标记的转化 | 第69-70页 |
| ·原生质融合重组子 | 第70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 甘油代谢工程构建乙醇高产菌株 | 第72-110页 |
| ·前言 | 第72-73页 |
| ·材料 | 第73-79页 |
| ·菌株与质粒 | 第73-76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·实验试剂配制 | 第76-77页 |
| ·酵母细胞转化所用试剂 | 第76-77页 |
| ·氨基酸的配制 | 第77页 |
| ·GAPN酶活测定所用试剂 | 第77页 |
| ·培养基的配制 | 第77-78页 |
| ·实验仪器 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-84页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第79-80页 |
| ·目的条带的回收与克隆 | 第80-81页 |
| ·目的条带的割胶回收 | 第80页 |
| ·目的片段与载体的酶切 | 第80-81页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第81页 |
| ·质粒DNA的抽提 | 第81-82页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第82页 |
| ·酵母蛋白的提取与含量测定 | 第82-83页 |
| ·蛋白的提取 | 第82-83页 |
| ·蛋白含量测定 | 第83页 |
| ·NADP~+依赖型GAPN酶活测定 | 第83-84页 |
| ·酶活的测定 | 第83页 |
| ·酶活的计算方法 | 第83-84页 |
| ·抗性标记辅助筛选酵母重组子 | 第84页 |
| ·实验结果 | 第84-106页 |
| ·构建FPS1基因缺失的实验单倍体菌株 | 第84-87页 |
| ·构建pUG6FAB质粒 | 第84-86页 |
| ·FPS1基因的敲除与检测 | 第86-87页 |
| ·染色体外表达异源gapN基因 | 第87-92页 |
| ·构建异源gapN基因表达质粒 | 第87-91页 |
| ·gapN基因异源表达与酶活测定 | 第91-92页 |
| ·实验菌株发酵性能测定 | 第92-96页 |
| ·生长特性和葡萄糖底物消耗 | 第92-93页 |
| ·代谢副产物的生成 | 第93页 |
| ·乙醇的生成 | 第93-96页 |
| ·构建FPS1基因位点整合异源gapN基因的工业酿酒菌株 | 第96-102页 |
| ·构建pUG7FAB质粒 | 第96-97页 |
| ·构建pUG6FG和pUG7FG质粒 | 第97-99页 |
| ·FPS1基因位点整合异源gapN基因的工业单倍体菌株 | 第99-101页 |
| ·基因改造工业单倍体菌株杂交及重组子的筛选 | 第101-102页 |
| ·构建FPS1基因缺失的二倍体菌株 | 第102页 |
| ·构建的工业酵母菌株特性测定 | 第102-106页 |
| ·GAPN酶活测定 | 第102页 |
| ·发酵特性测定 | 第102-106页 |
| ·讨论 | 第106-108页 |
| ·FPS1基因敲除对酵母菌株发酵性能的影响 | 第106-107页 |
| ·表达异源gapN基因对酵母菌株发酵性能的影响 | 第107页 |
| ·FPS1基因缺失与异源GAPN酶系的协同效应 | 第107-108页 |
| ·基因代谢工程改良酿酒酵母菌株发酵性能 | 第108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 第五章 利用改进的全基因组重排技术提高菌株乙醇耐受力 | 第110-129页 |
| ·前言 | 第110页 |
| ·材料 | 第110-113页 |
| ·菌株与质粒 | 第110-111页 |
| ·主要试剂 | 第111-112页 |
| ·实验试剂的配制 | 第112页 |
| ·诱变试剂的配制 | 第112页 |
| ·染色液的配制 | 第112页 |
| ·培养基的配制 | 第112-113页 |
| ·实验仪器 | 第113页 |
| ·方法 | 第113-114页 |
| ·EMS诱变 | 第113页 |
| ·紫外诱变 | 第113-114页 |
| ·菌株乙醇耐受力测定 | 第114页 |
| ·生长曲线测定 | 第114页 |
| ·细胞膜完整性分析 | 第114页 |
| ·结果 | 第114-126页 |
| ·诱变剂的选择 | 第114-116页 |
| ·EMS诱变 | 第114-115页 |
| ·紫外诱变 | 第115-116页 |
| ·全基因组重排 | 第116-123页 |
| ·抗性标记辅助的全基因组重排 | 第116-117页 |
| ·乙醇耐受力分析 | 第117-119页 |
| ·重组子的发酵性能 | 第119-123页 |
| ·Cre/loxP系统去除抗性筛选标记 | 第123-126页 |
| ·质粒pSH的构建 | 第123-125页 |
| ·抗性标记的剔除 | 第125-126页 |
| ·讨论 | 第126-128页 |
| ·抗性标记辅助的全基因组重排技术 | 第126-127页 |
| ·酵母乙醇耐受力机制 | 第127页 |
| ·标记剔除系统的建立 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-129页 |
| 第六章 全文总结及后续工作建议 | 第129-133页 |
| ·全文总结 | 第129-131页 |
| ·本文创新点 | 第131-132页 |
| ·后续工作建议 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-141页 |
| 附录 | 第141-142页 |
| 作者简介 | 第142页 |
