摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
1 前言 | 第9-19页 |
1.1 木质纤维素及其结构 | 第9-10页 |
1.1.1 木质纤维素的生物转化 | 第9页 |
1.1.2 木质纤维素的结构 | 第9-10页 |
1.2 木质纤维素降解酶系 | 第10-14页 |
1.2.1 纤维素酶 | 第11页 |
1.2.2 半纤维素酶 | 第11-12页 |
1.2.3 木质素酶 | 第12页 |
1.2.4 辅助蛋白 | 第12-14页 |
1.3 融合蛋白的应用及构建 | 第14-17页 |
1.3.1 融合蛋白在木质纤维素降解酶中的应用 | 第14-15页 |
1.3.2 融合蛋白的构建方法 | 第15-16页 |
1.3.3 连接肽对融合蛋白的影响 | 第16-17页 |
1.4 本课题的立题背景及研究内容 | 第17-19页 |
1.4.1 立题背景 | 第17页 |
1.4.2 研究内容 | 第17-19页 |
2 材料与方法 | 第19-46页 |
2.1 实验材料 | 第19-22页 |
2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
2.1.2 主要仪器 | 第19页 |
2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
2.1.4 主要培养基及溶液 | 第20-22页 |
2.2 实验方法 | 第22-40页 |
2.2.1 目的基因的克隆 | 第22-28页 |
2.2.2 融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第28-34页 |
2.2.3 内切葡聚糖酶EGΠ在里氏木霉中的表达 | 第34-37页 |
2.2.4 目的蛋白的纯化 | 第37-38页 |
2.2.5 融合蛋白酶学性质的分析 | 第38-40页 |
2.2.6 玉米芯的预处理 | 第40页 |
2.2.7 融合蛋白水解玉米芯 | 第40页 |
2.2.8 融合蛋白协同纤维素酶水解玉米芯 | 第40页 |
2.3 分析方法 | 第40-46页 |
2.3.1 蛋白质分析 | 第40-42页 |
2.3.2 还原糖含量的测定 | 第42-43页 |
2.3.3 酶活的测定 | 第43-45页 |
2.3.4 玉米芯主要组分的测定 | 第45页 |
2.3.5 单糖含量的测定 | 第45-46页 |
3 结果与讨论 | 第46-65页 |
3.1 目的基因表达载体的构建与表达 | 第46-54页 |
3.1.1 里氏木霉基因组及总RNA的提取 | 第46页 |
3.1.2 目的基因的克隆 | 第46-48页 |
3.1.3 重组表达载体的构建与验证 | 第48-50页 |
3.1.3.1 毕赤酵母重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
3.1.3.2 里氏木霉重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
3.1.4 重组毕赤酵母的筛选与诱导表达 | 第50-51页 |
3.1.5 重组里氏木霉的筛选与表达 | 第51-53页 |
3.1.6 目的蛋白的纯化及分析 | 第53-54页 |
3.2 融合蛋白酶学性质的分析 | 第54-59页 |
3.2.1 融合后木聚糖酶最适pH及最适温度的变化 | 第54-55页 |
3.2.2 融合后SWOI最适pH及最适温度的变化 | 第55-56页 |
3.2.3 融合后金属离子对木聚糖酶酶活的影响 | 第56页 |
3.2.4 目的蛋白的温度稳定性 | 第56-57页 |
3.2.5 融合蛋白在纤维素底物上的吸附 | 第57-58页 |
3.2.6 融合蛋白的比活力 | 第58-59页 |
3.3 融合蛋白在玉米芯降解中的作用 | 第59-65页 |
3.3.1 玉米芯主要组分的分析 | 第59页 |
3.3.2 融合蛋白对玉米芯的水解 | 第59-61页 |
3.3.3 融合蛋白协同纤维素酶水解玉米芯 | 第61-65页 |
4 结论 | 第65-66页 |
5 展望 | 第66-67页 |
6 参考文献 | 第67-73页 |
7 硕士在读期间发表论文情况 | 第73-74页 |
8 致谢 | 第74页 |