| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-41页 |
| ·自噬 | 第18-26页 |
| ·自噬是一种可调控的溶酶体降解途径 | 第18-21页 |
| ·自噬作为一种细胞死亡机制 | 第21-22页 |
| ·自噬作为一种细胞生存机制 | 第22-24页 |
| ·自噬作为一种细胞的自身清除机制 | 第24页 |
| ·自噬相关蛋白Beclin 1 及LC3 | 第24-26页 |
| ·凋亡 | 第26-30页 |
| ·细胞凋亡的分子机制 | 第26-28页 |
| ·细胞凋亡与线粒体 | 第28-30页 |
| ·自噬与凋亡的相互关系 | 第30-33页 |
| ·自噬与恶性疾病的关系 | 第33-35页 |
| ·细胞内氯通道蛋白4 和14-3-3 蛋白家族 | 第35-41页 |
| ·细胞内氯通道蛋白4 | 第35-38页 |
| ·14-3-3 蛋白家族 | 第38-41页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第41-57页 |
| ·实验材料 | 第41-43页 |
| ·主要仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·质粒及菌株 | 第41-42页 |
| ·细胞株 | 第42页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第42页 |
| ·荧光染色相关试剂配制 | 第42-43页 |
| ·Western Blot 相关试剂配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-57页 |
| ·细胞培养 | 第43-44页 |
| ·pSilencer~(TM) 3.1-H1 neo CLIC4 siRNA 载体构建 | 第44-47页 |
| ·重组质粒转染及转染效率检测 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR 半定量分析 | 第48-50页 |
| ·蛋白提取及浓度测定 | 第50-51页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第51-53页 |
| ·细胞生长抑制试验-MTT | 第53页 |
| ·免疫荧光检测 | 第53-54页 |
| ·流式细胞术(Flow cytometry，FCM)分析 | 第54-55页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第55-56页 |
| ·统计学处理 | 第56-57页 |
| 第3章 结果 | 第57-89页 |
| ·线粒体氯通道 4 基因 siRNA 表达载体的构建及其沉默效应鉴定 | 第57-62页 |
| ·pSH1Si-CLIC4 表达载体的构建 | 第57-60页 |
| ·pSH1Si-CLIC4 表达质粒转染 | 第60页 |
| ·RT-PCR 检测转染 pSH1Si-CLIC4 的 U251 细胞 CLIC4 mRNA 表达 | 第60-61页 |
| ·Western Blot 检测转染 pSH1Si-CLIC4 的 U251 细胞 CLIC4 蛋白表达 | 第61-62页 |
| ·转染 pSH1Si- CLIC4 对神经胶质瘤 U251 细胞的影响 | 第62-66页 |
| ·MTT 法检测转染 pSH1Si-CLIC4 对细胞生存率的影响 | 第62-63页 |
| ·转染 pSH1Si-CLIC4 后检测凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2 的表达 | 第63页 |
| ·Western blot 检测转染 pSH1Si-CLIC4 后细胞 caspase-3 与 cytosolic cyt c 蛋白的表达 | 第63-64页 |
| ·MDC 荧光染色检测转染 pSH1Si-CLIC4 后细胞自噬活性变化 | 第64-65页 |
| ·LC3 荧光染色检测转染 pSH1Si-CLIC4 后细胞 LC3 蛋白的变化 | 第65-66页 |
| ·饥饿对神经胶质瘤U251 细胞自噬和凋亡的影响 | 第66-74页 |
| ·MDC 荧光染色检测饥饿条件下U251 细胞自噬活性变化 | 第66-68页 |
| ·LC3 荧光染色检测饥饿条件下U251 细胞LC3 蛋白的变化 | 第68页 |
| ·Acridine orange 染色饥饿条件下检测酸性自噬空泡积聚 | 第68-70页 |
| ·Western Blot 检测检测饥饿条件下自噬相关蛋白LC3 的表达 | 第70页 |
| ·Western Blot 检测检测饥饿条件下凋亡相关蛋白Bax 和Bcl-2 的表达 | 第70-71页 |
| ·Western Blot 检测检测饥饿条件下凋亡相关蛋白 cleaved caspase-3 和胞浆 cyt c 的表达 | 第71-72页 |
| ·流式细胞术检测饥饿对U251 细胞凋亡的影响 | 第72-74页 |
| ·抑制CLIC4 表达对于饥饿诱导U251 细胞自噬的影响 | 第74-78页 |
| ·LC3 荧光染色检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对U251 细胞LC3 蛋白的影响 | 第74页 |
| ·MDC 荧光染色检测饥饿条件下抑制 CLIC4 表达对 U251 细胞自噬活性的影响 | 第74-76页 |
| ·Acridine orange 染色检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对酸性自噬空泡积聚的影响 | 第76-77页 |
| ·Western Blot 检测检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对自噬相关蛋白LC3 表达的影响 | 第77-78页 |
| ·抑制CLIC4 表达对于饥饿条件下U251 细胞凋亡的影响 | 第78-81页 |
| ·Western Blot 检测抑制CLIC4 表达对于凋亡相关蛋白caspase-3 和胞浆cytc 表达的影响 | 第78-80页 |
| ·流式细胞术检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对U251 细胞凋亡率的影响 | 第80-81页 |
| ·抑制CLIC4 表达对于饥饿条件下14-3-3 蛋白的影响 | 第81-84页 |
| ·荧光染色检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对14-3-3 蛋白与CLIC4 共定位的影响 | 第81-82页 |
| ·免疫共沉淀检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对14-3-3 与CLIC4 蛋白相互作用的影响 | 第82页 |
| ·Western Blot 检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对Beclin 1 蛋白表达的影响 | 第82-83页 |
| ·Western Blot 检测饥饿条件下抑制CLIC4 表达对14-3-3 蛋白的表达的影响 | 第83-84页 |
| ·抑制CLIC4 表达对于饥饿条件下U251 细胞线粒体的影响 | 第84-89页 |
| ·Rhodamine 123 染色法检测线粒体膜电势(ΔΨ)的变化 | 第84-86页 |
| ·RT-PCR 检测线粒体融合基因的变化 | 第86-87页 |
| ·RT-PCR 检测线粒体分裂基因的变化 | 第87-89页 |
| 第4章 讨论 | 第89-94页 |
| 第5章 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
