| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 轮状病毒概况 | 第12-14页 |
| 1.1.1 轮状病毒的外形特征 | 第12-13页 |
| 1.1.2 轮状病毒的主要结构蛋白 | 第13-14页 |
| 1.1.3 轮状病毒疫苗的研究进展 | 第14页 |
| 1.2 肠道病毒71型概况 | 第14-16页 |
| 1.2.1 肠道病毒71型概况 | 第14-16页 |
| 1.2.2 肠道病毒71型疫苗的研究进展 | 第16页 |
| 1.3 病毒样颗粒疫苗 | 第16-17页 |
| 1.4 杆状病毒多基因表达载体系统的主要优势 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 基因、质粒、菌株、细胞 | 第19页 |
| 2.1.2 相关试剂和酶 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.2 常用溶液和试剂的配制 | 第21-23页 |
| 2.2.1 核酸电泳相关试剂的配制 | 第21页 |
| 2.2.2 SDS-PAGE蛋白电泳相关试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.2.3 抗生素的配制 | 第22页 |
| 2.2.4 Western Blot所需试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.2.5 实验相关的其他试剂的配制 | 第23页 |
| 2.3 培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.3.1 细菌LB培养基的配制 | 第23页 |
| 2.3.2 昆虫细胞Grace培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.4 常用的分子生物学操作方法 | 第24-28页 |
| 2.4.1 小量质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.4.2 病毒基因组的提取 | 第25页 |
| 2.4.3 琼脂糖凝胶电泳的操作方法 | 第25-26页 |
| 2.4.4 制备感受态细胞的操作方法 | 第26-27页 |
| 2.4.5 E.coli Top10感受态细胞的转化 | 第27-28页 |
| 2.5 培养昆虫细胞的基本操作 | 第28-29页 |
| 2.5.1 细胞的冻存 | 第28页 |
| 2.5.2 细胞的复苏 | 第28-29页 |
| 2.5.3 细胞的传代 | 第29页 |
| 2.5.4 细胞的计数 | 第29页 |
| 2.6 多种杆状病毒转移载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.6.1 RV VP2、VP4、VP6、VP7基因和EV71 VP1基因的扩增 | 第29-31页 |
| 2.6.2 多种杆状病毒转移载体的构建 | 第31页 |
| 2.7 多种重组杆状病毒的获得 | 第31-34页 |
| 2.7.1 Tn7转座和cre-lox P位点特异性重组 | 第31-33页 |
| 2.7.2 重组细菌病毒菌液感染昆虫细胞 | 第33-34页 |
| 2.7.3 多种重组杆状病毒的获得 | 第34页 |
| 2.8 病毒滴定和病毒的扩大培养 | 第34-36页 |
| 2.8.1 病毒滴度的测定 | 第34-35页 |
| 2.8.2 病毒的扩大培养 | 第35页 |
| 2.8.3 细胞的扩大培养 | 第35-36页 |
| 2.9 重组杆状病毒表达蛋白的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.9.1 细胞的处理 | 第36页 |
| 2.9.2 SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.9.3 Western Blot检测蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.10 蛋白的纯化及鉴定 | 第38-39页 |
| 2.11 透射电镜观察病毒样颗粒的组装 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-55页 |
| 3.1 携带不同基因的重组杆状病毒的构建和鉴定 | 第40-43页 |
| 3.1.1 携带轮状病毒VP2、VP4、VP6、VP7基因和肠道病毒 71 VP1基因的杆状病毒阳性菌液的鉴定 | 第40-43页 |
| 3.1.2 携带不同基因的重组杆状病毒的构建 | 第43页 |
| 3.2 提取病毒基因组并利用PCR技术检测目的基因 | 第43-47页 |
| 3.2.1 提取病毒基因组 | 第43页 |
| 3.2.2 PCR技术检测病毒基因组中的目的基因 | 第43-46页 |
| 3.2.3 病毒滴度的测定 | 第46-47页 |
| 3.3 重组杆状病毒感染Sf9细胞的荧光图片 | 第47-48页 |
| 3.4 SDS-PAGE检测不同重组病毒各基因的蛋白表达 | 第48-49页 |
| 3.5 Western Blot检测不同重组病毒各基因蛋白表达 | 第49-53页 |
| 3.6 观察病毒样颗粒的组装 | 第53-55页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
