| 论文中的主要创新点 | 第4-8页 |
| 缩略词 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 总前言 | 第14-15页 |
| 第一章 靶向肾型谷氨酰胺酶（KGA）的药物PSBK的发现以及活性评价 | 第15-59页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一节. 小分子化合物的虚拟筛选（分子对接） | 第16-18页 |
| 1. 虚拟筛选所用计算机和软件 | 第16页 |
| 2. KGA蛋白质晶体结构及其处理 | 第16页 |
| 3. 化合物的选择 | 第16页 |
| 4. 对接过程 | 第16-17页 |
| 5．对接结果 | 第17-18页 |
| 第二节．KGA的基因克隆、蛋白质的表达与纯化 | 第18-27页 |
| 1．表达载体 | 第18-19页 |
| 2. 材料试剂与仪器 | 第19-21页 |
| 2.1 材料试剂 | 第19页 |
| 2.2 仪器 | 第19-21页 |
| 3 常用溶液配制 | 第21-22页 |
| 4.实验步骤 | 第22-26页 |
| 5 实验结果与讨论 | 第26-27页 |
| 第三节．PSBK体外KGA酶活性抑制试验其抑制形式的探索 | 第27-31页 |
| 1.试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 2.实验原理 | 第28-29页 |
| 3.实验步骤 | 第29-30页 |
| 4.实验结果与讨论 | 第30-31页 |
| 第四节. MST测定溶液状态下PSBK与重组KGA结合力 | 第31-33页 |
| 1.实验原理 | 第31-32页 |
| 2 实验步骤 | 第32页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第32-33页 |
| 第五节. PSBK的体外、体内抗肿瘤活性研究 | 第33-48页 |
| 1. 实验动物 | 第33页 |
| 2. 实验仪器与材料 | 第33-35页 |
| 2.1 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 3. 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.1 Western Blot实验检测肿瘤细胞中相关蛋白的表达 | 第35页 |
| 3.2 肿瘤细胞总蛋白质样品的提取 | 第35页 |
| 3.3 BCA法测定总蛋白浓度 | 第35页 |
| 3.4 电泳 | 第35-36页 |
| 3.5 Western Blot转膜 | 第36页 |
| 3.6 免疫检测 | 第36页 |
| 3.7 细胞培养 | 第36页 |
| 3.8 化合物的肿瘤细胞抑制实验 | 第36-37页 |
| 3.9 细胞增殖实验 | 第37页 |
| 3.10 EDU和DAPI双染色检测细胞增殖。 | 第37页 |
| 3.11 细胞热迁移实验 | 第37页 |
| 3.12 细胞内代谢物质含量检测 | 第37-38页 |
| 3.13 细胞凋亡检测 | 第38页 |
| 3.14 动物实验分组及给药 | 第38页 |
| 4. 实验结果与讨论 | 第38-48页 |
| 4.1 PSBK选择性的抑制谷氨酰胺依赖性细胞的增殖 | 第39-41页 |
| 4.2 PSBK可以与肿瘤细胞中靶标蛋白KGA相结合 | 第41页 |
| 4.3 PSBK在体内外抗SW1990肿瘤细胞增殖的作用 | 第41-44页 |
| 4.4 PSBK能够阻断谷氨酰胺的代谢 | 第44-46页 |
| 4.5 PSBK在联合治疗中的协同作用 | 第46-48页 |
| 第六节．KGA与PSBK共结晶的获得和结构解析 | 第48-52页 |
| 1. 仪器与试剂 | 第48页 |
| 2. 蛋白质结晶实验方法 | 第48-49页 |
| 3. 结果与讨论 | 第49-52页 |
| 3.1 蛋白晶体初筛结果 | 第50页 |
| 3.2 优化结晶条件 | 第50页 |
| 3.3 晶体衍射数据收集 | 第50-52页 |
| 总结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 第二章 新型HK2天然小分子抑制剂的虚拟筛选及活性研究 | 第59-82页 |
| 前言 | 第59-60页 |
| 第一节. 以HK2靶点的天然产物虚拟筛选 | 第60-62页 |
| 1 仪器和方法 | 第60页 |
| 2.结果与讨论 | 第60-62页 |
| 第二节. 以HK2大量表达和纯化 | 第62-67页 |
| 1.仪器和材料 | 第62页 |
| 2.溶液配制 | 第62-63页 |
| 3.基因与载体 | 第63-64页 |
| 4.实验方法 | 第64页 |
| 5.结果与讨论 | 第64-67页 |
| 5.1 HK2小量表达 | 第64-65页 |
| 5.2 HK2大量表达与纯化 | 第65-67页 |
| 第三节. 化合物对HK2体外酶活性抑制以及其抑制形式的探讨 | 第67-72页 |
| 1.实验原理 | 第67-68页 |
| 2.实验仪器与材料 | 第68-69页 |
| 2.1. 仪器 | 第68页 |
| 2.2 实验材料 | 第68-69页 |
| 3. 实验方法 | 第69页 |
| 4. 实验结果 | 第69-72页 |
| 第四节. 化合物与HK2蛋白的结合解离常数的测定 | 第72-74页 |
| 1.实验原理 | 第72页 |
| 2.实验步骤 | 第72-73页 |
| 3.实验结果与讨论 | 第73-74页 |
| 第五节. 化合物对肿瘤细胞的肿瘤细胞抑制测试 | 第74-77页 |
| 1.实验材料与实验仪器 | 第74-75页 |
| 2.实验方法 | 第75页 |
| 3.实验结果 | 第75-77页 |
| 总结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 综述 | 第82-96页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 附录 | 第96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
