| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词及注解 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-22页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素 | 第10-12页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素简介 | 第10页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素的分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 氨基糖苷类抗生素的生物合成研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 黑暗链霉菌研究概况 | 第12-17页 |
| 1.2.1 黑暗链霉菌简介 | 第12页 |
| 1.2.2 黑暗链霉菌次级代谢产物 | 第12-13页 |
| 1.2.3 黑暗链霉菌生物合成研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3 小单孢菌研究概况 | 第17-19页 |
| 1.3.1 小单孢菌简介 | 第17-18页 |
| 1.3.2 小单孢菌生物合成研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 氨基寡糖生物合成基因重组的研究 | 第19-20页 |
| 1.4.1 基因替换 | 第19-20页 |
| 1.4.2 基因重组 | 第20页 |
| 1.5 选题依据与研究内容 | 第20-22页 |
| 1.5.1 选题依据 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂 | 第24-26页 |
| 2.1.4 仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 菌株培养与保藏 | 第27-28页 |
| 2.2.2 聚合酶链式反应(PCR) | 第28-29页 |
| 2.2.3 DNA酶切反应 | 第29页 |
| 2.2.4 DNA酶连反应 | 第29-30页 |
| 2.2.5 DNA凝胶电泳检测 | 第30页 |
| 2.2.6 DNA片段回收 | 第30-31页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31页 |
| 2.2.8 碱裂解法提取质粒DNA | 第31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌-放线菌的接合转移 | 第31-32页 |
| 2.2.10 放线菌基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.11 放线菌的摇瓶发酵 | 第33页 |
| 2.2.12 二剂量法测定抗生素效价 | 第33页 |
| 2.2.13 放线菌次级代谢产物的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.14 质谱法(MS)检测次级代谢产物 | 第34页 |
| 2.2.15 绛红色小单孢菌与黑暗链霉菌原生质体融合 | 第34-37页 |
| 第三章 单基因genK异源组合的研究 | 第37-45页 |
| 3.1 重组质粒pKM103的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.1 genK的扩增 | 第38-39页 |
| 3.1.2 重组质粒pKM103的构建与验证 | 第39-40页 |
| 3.2 基因组合突变株的筛选 | 第40-42页 |
| 3.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.2 双交换工程菌的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3 工程菌TKM202次级代谢产物分析 | 第42-43页 |
| 3.4 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 双基因异源组合的研究 | 第45-60页 |
| 4.1 重组质粒pDM103的构建 | 第45-48页 |
| 4.1.1 genD1的扩增 | 第46-47页 |
| 4.1.2 重组质粒pDM103的构建与验证 | 第47-48页 |
| 4.2 基因组合突变株的筛选 | 第48-50页 |
| 4.2.1 单交换工程菌的筛选 | 第49页 |
| 4.2.2 双交换工程菌的筛选 | 第49-50页 |
| 4.3 工程菌TDM202次级代谢产物分析 | 第50-52页 |
| 4.4 重组质粒pXL104的构建 | 第52-56页 |
| 4.4.1 同源交换臂及genX的扩增 | 第53-54页 |
| 4.4.2 重组质粒pXL104的构建与验证 | 第54-56页 |
| 4.5 基因组合突变株的筛选 | 第56-57页 |
| 4.5.1 单交换工程菌的鉴定 | 第56页 |
| 4.5.2 双交换工程菌的鉴定 | 第56-57页 |
| 4.6 工程菌TXL102次级代谢产物分析 | 第57-58页 |
| 4.7 小结 | 第58-60页 |
| 第五章 卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究 | 第60-66页 |
| 5.1 tobZ基因缺失突变株的构建 | 第60-61页 |
| 5.1.1 单交换工程菌的鉴定 | 第60页 |
| 5.1.2 双交换工程菌的鉴定 | 第60-61页 |
| 5.2 工程菌ST314次级代谢产物分析 | 第61-62页 |
| 5.3 工程菌ST314发酵特性的研究 | 第62-65页 |
| 5.3.1 自然分离 | 第62页 |
| 5.3.2 紫外诱变处理 | 第62-63页 |
| 5.3.3 工程菌ST314-Ⅱ稳定性考察 | 第63页 |
| 5.3.4 种子培养对发酵单位的影响 | 第63-65页 |
| 5.3.5 发酵代谢曲线的绘制 | 第65页 |
| 5.4 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 科间多基因组合的探索 | 第66-81页 |
| 6.1 小单孢抗性标记工程菌的构建 | 第66-72页 |
| 6.1.1 重组质粒pEB204的构建 | 第66-70页 |
| 6.1.2 基因组合突变株的筛选 | 第70-71页 |
| 6.1.3 工程菌GEB202次级代谢产物分析 | 第71-72页 |
| 6.2 跨科原生质体融合的探索 | 第72-80页 |
| 6.2.1 孢子悬液的制备 | 第73页 |
| 6.2.2 制备原生质体菌丝培养的考察 | 第73-74页 |
| 6.2.3 Gly浓度对菌丝体生长与原生质体形成的影响 | 第74-75页 |
| 6.2.4 酶解条件的探索 | 第75-77页 |
| 6.2.5 原生质体融合的探索 | 第77-80页 |
| 6.3 小结 | 第80-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录 | 第89-93页 |
| 个人简历 | 第93页 |