| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第11-12页 |
| 1.2 克隆载体的发展 | 第12-13页 |
| 1.3 BAC载体的发展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 pBAC108L克隆载体 | 第13-14页 |
| 1.3.2 pCUGIBAC1克隆载体 | 第14-15页 |
| 1.3.3 pHZAUBAC1克隆载体 | 第15-16页 |
| 1.3.4 pMSBBACs克隆载体 | 第16-17页 |
| 1.4 BAC文库简介与应用 | 第17-19页 |
| 1.5 研究目的 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-44页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.2 主要试剂及配制方法 | 第21-22页 |
| 2.3 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.4 实验方法 | 第22-44页 |
| 2.4.1 放线菌BAC载体改造及放线菌0026 BAC文库构建 | 第22-33页 |
| 2.4.1.1 放线菌pHZAUBACFXJ1载体改造 | 第22-24页 |
| 2.4.1.2 pHZAUBACFXJ1 BAC载体制备 | 第24-27页 |
| 2.4.1.3 放线菌0026基因组DNA plug的制备 | 第27-28页 |
| 2.4.1.4 放线菌0026基因组DNA plug的预电泳 | 第28页 |
| 2.4.1.5 放线菌0026基因组DNA的预先部分酶切 | 第28-29页 |
| 2.4.1.6 放线菌0026大片段DNA的2次筛选 | 第29-31页 |
| 2.4.1.7 连接、脱盐、预转化与检测 | 第31-32页 |
| 2.4.1.8 放线菌文库质量的检测 | 第32-33页 |
| 2.4.1.9 放线菌BAC文库的复制和混合池构建 | 第33页 |
| 2.4.2 矮牵牛BAC文库构建及相关基因筛选 | 第33-44页 |
| 2.4.2.1 BAC载体pIndigoBAC536-S制备 | 第33-36页 |
| 2.4.2.2 HMW矮牵牛大片段基因组DNA的制备 | 第36-37页 |
| 2.4.2.3 寻找矮牵牛基因组DNA部分酶切的最适合条件 | 第37-38页 |
| 2.4.2.4 合适大小的矮牵牛基因组DNA的获得 | 第38-39页 |
| 2.4.2.5 矮牵牛基因组DNA的连接 | 第39页 |
| 2.4.2.6 脱盐、预转化、插入片段大小检测 | 第39-40页 |
| 2.4.2.7 大量转化、挑拣单克隆 | 第40页 |
| 2.4.2.8 矮牵牛BAC文库的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.4.2.9 矮牵牛BAC文库的复制 | 第41-42页 |
| 2.4.2.10 矮牵牛BAC文库的基因筛选 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-61页 |
| 3.1 放线菌BAC载体改造及放线菌0026BAC文库构建 | 第44-52页 |
| 3.1.1 放线菌pHZAUBACFXJ1载体的改造 | 第44-46页 |
| 3.1.2 放线菌pHZAUBACFXJ1-s质粒载体的制备 | 第46-48页 |
| 3.1.3 放线菌0026基因组DNAplug的制备 | 第48页 |
| 3.1.4 放线菌0026基因组DNA的预电泳与部分酶切 | 第48-49页 |
| 3.1.5 放线菌0026大片段DNA的两次筛选 | 第49-50页 |
| 3.1.6 大片段DNA的电洗脱回收与检测 | 第50-51页 |
| 3.1.7 放线菌大片段DNA的连接、脱盐与预转化 | 第51-52页 |
| 3.2 矮牵牛BAC文库构建及相关基因筛选 | 第52-61页 |
| 3.2.1 HMW矮牵牛大片段基因组DNA的制备 | 第52-53页 |
| 3.2.2 寻找矮牵牛基因组DNA部分酶切的最适合条件 | 第53-54页 |
| 3.2.3 合适大小的矮牵牛基因组DNA的获得 | 第54-55页 |
| 3.2.4 脱盐、预转化、插入片段大小检测 | 第55-56页 |
| 3.2.5 大量转化、挑拣单克隆 | 第56页 |
| 3.2.6 矮牵牛BAC文库的鉴定 | 第56-57页 |
| 3.2.7 矮牵牛BAC文库基因筛选 | 第57-61页 |
| 3.2.7.1 一级混合池构建与PCR筛选 | 第57-58页 |
| 3.2.7.2 二级混合池构建与PCR筛选 | 第58-61页 |
| 4 讨论 | 第61-65页 |
| 4.1 关于高质量的大片段外源DNA的获取 | 第61页 |
| 4.2 关于放线菌BAC载体的改造 | 第61-62页 |
| 4.3 关于放线菌BAC文库的构建 | 第62页 |
| 4.4 关于矮牵牛重瓣花BAC文库的构建 | 第62-63页 |
| 4.5 关于矮牵牛BAC文库基因筛选 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录 A 实验部分试剂配方 | 第73-74页 |
| 附录 B BAC质粒提取步骤 | 第74-75页 |
| 附录 C 基因筛选引物信息 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
