| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 前言 | 第14-22页 |
| 第一部分 对7-木糖-10-去乙酰紫杉醇有转化活性的菌株筛选及菌种鉴定 | 第22-62页 |
| 第一章 对7-木糖-10-去乙酰紫杉醇有转化活性的菌株筛选 | 第22-29页 |
| 1. 实验材料与设备 | 第23-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第23页 |
| 1.2 实验设备 | 第23-24页 |
| 2. 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.1 准备工作 | 第24-25页 |
| 2.1.1 土壤样本的采集 | 第24页 |
| 2.1.2 筛选培养基的制备 | 第24页 |
| 2.1.3 土壤溶液的制备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇诱导溶液的配制 | 第25页 |
| 2.1.5 显色剂的配制 | 第25页 |
| 2.2 接种及培养 | 第25页 |
| 2.3 显色及观察 | 第25-26页 |
| 2.4 传代及保存 | 第26页 |
| 3. 实验结果 | 第26-27页 |
| 4. 实验讨论 | 第27-28页 |
| 小结 | 第28-29页 |
| 第二章 活性菌种的鉴定 | 第29-62页 |
| 1. 实验与设备 | 第29-30页 |
| 1.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.2 实验设备 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-41页 |
| 2.1 微生物的形态学观察 | 第31-32页 |
| 2.1.1 微生物的形态学观察及革兰氏染色 | 第31页 |
| 2.1.2 微生物形态学的扫描电镜观察 | 第31-32页 |
| 2.2 微生物分类与鉴定-16S rDNA鉴定 | 第32-38页 |
| 2.2.1 细菌基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2 16S rDNA基因片段的PCR扩增、扩增产物纯化 | 第33-35页 |
| 2.2.3 16S rDNA克隆载体的构建、感受态E.coli的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.4 16S rDNA阳性克隆筛选 | 第36-38页 |
| 2.2.5 DNA测序 | 第38页 |
| 2.2.6 DNA序列的基因数据库序列比对 | 第38页 |
| 2.3 ITM-1512生理生化指标的测定 | 第38-39页 |
| 2.4 ITM-1512 G+C mol%含量测定 | 第39页 |
| 2.5 ITM-1512菌株的脂肪酸成分分析 | 第39-40页 |
| 2.6 ITM-1512gyrB基因序列 | 第40-41页 |
| 3. 实验结果 | 第41-59页 |
| 3.1 微生物的形态学观察 | 第41-43页 |
| 3.1.1 微生物菌落培养条件描述 | 第41-42页 |
| 3.1.2 微生物革兰氏染色结果 | 第42页 |
| 3.1.3 扫描电镜观察结果 | 第42-43页 |
| 3.2 微生物分类与鉴定-16SrDNA鉴定 | 第43-55页 |
| 3.2.1 菌种总DNA电泳图 | 第43-44页 |
| 3.2.2 菌种16S rDNA电泳图 | 第44页 |
| 3.2.3 蓝白斑筛选含16S rDNA的阳性克隆 | 第44-45页 |
| 3.2.4 含不同菌株16S rDNA的阳性克隆质粒电泳图 | 第45-55页 |
| 3.3 ITM-1512生理生化指标的测定 | 第55-56页 |
| 3.4 ITM-1512的G+C mol%含量测定 | 第56-57页 |
| 3.5 ITM-1512的细胞脂肪酸成分 | 第57-58页 |
| 3.7 gyrB基因序列 | 第58-59页 |
| 4. 实验讨论 | 第59-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 第二部分 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇的生物转化研究 | 第62-106页 |
| 第一章 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇生物转化终产物的鉴定 | 第63-72页 |
| 1. 实验材料与设备 | 第63-64页 |
| 1.1 实验材料 | 第63-64页 |
| 1.2 实验设备 | 第64页 |
| 2. 实验方法 | 第64-66页 |
| 2.1 生物转化样本的制备 | 第64-65页 |
| 2.2 超高压液相色谱仪色谱检测 | 第65页 |
| 2.3 液相色谱-质谱联用仪检测 | 第65-66页 |
| 3. 实验结果 | 第66-70页 |
| 3.1 超高压液相检测结果 | 第66-69页 |
| 3.2 液相色谱-质谱联用仪检测结果 | 第69-70页 |
| 4. 实验讨论 | 第70-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 第二章 生物样品中7-木糖-10-去乙酰紫杉醇等化合物分析方法学建立与确证 | 第72-83页 |
| 1. 实验材料与设备 | 第72-73页 |
| 1.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 1.2 实验设备 | 第73页 |
| 2. 实验方法 | 第73-76页 |
| 2.1 专属性研究 | 第73-74页 |
| 2.2 标准曲线的测定 | 第74-75页 |
| 2.2.1 储备液的配制 | 第74页 |
| 2.2.2 内标地西泮溶液的配制 | 第74页 |
| 2.2.3 生物基质的制备 | 第74页 |
| 2.2.4 标准溶液的配制 | 第74-75页 |
| 2.3 精密度准确度测定 | 第75页 |
| 2.4 储备液4℃放置稳定性 | 第75页 |
| 2.5 样本室温24小时放置稳定性 | 第75-76页 |
| 3. 实验结果 | 第76-81页 |
| 3.1 专属性研究 | 第76-78页 |
| 3.2 标准曲线的测定 | 第78-79页 |
| 3.3 精密度准确度测定 | 第79页 |
| 3.4 储备液4℃放置稳定性 | 第79-80页 |
| 3.5 检测样本室温24小时放置稳定性 | 第80-81页 |
| 4. 实验讨论 | 第81-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 第三章 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇生物转化条件的研究 | 第83-100页 |
| 1. 实验材料及设备 | 第83-85页 |
| 1.1 实验材料 | 第83-84页 |
| 1.2 实验设备 | 第84-85页 |
| 2. 实验方法 | 第85-88页 |
| 2.1 培养基配方的选择 | 第85-86页 |
| 2.2 活性菌株在液体培养基中生长曲线的测定及培养温度的选择 | 第86页 |
| 2.3 生物转化时间的选择 | 第86页 |
| 2.4 六株阳性菌株在液体培养基中转化效率的比较 | 第86-87页 |
| 2.5 高转化效率菌株的转化稳定性检测 | 第87页 |
| 2.6 培养基状态的选择 | 第87页 |
| 2.7 半固体培养基中琼脂加入量的优化 | 第87-88页 |
| 3. 实验结果 | 第88-95页 |
| 3.1 培养基配方的选择 | 第88页 |
| 3.2 活性菌株在液体培养基中生长曲线的测定及温度的选择 | 第88-89页 |
| 3.3 生物转化时间的选择 | 第89-90页 |
| 3.4 六株阳性菌株在液体培养基中转化效率的比较 | 第90-91页 |
| 3.5 高转化效率菌株的转化稳定性检测 | 第91-93页 |
| 3.6 培养基状态的选择 | 第93-94页 |
| 3.7 半固体培养基中琼脂加入量的优化 | 第94-95页 |
| 4. 实验讨论 | 第95-99页 |
| 4.1 碳源的选择 | 第95-96页 |
| 4.2 培养基pH | 第96-97页 |
| 4.3 底物的加入时间 | 第97页 |
| 4.4 加入的底物浓度 | 第97-99页 |
| 小结 | 第99-100页 |
| 第四章 7-木糖-10-去乙酰紫杉醇生物转化机理初探 | 第100-106页 |
| 1. 实验材料与设备 | 第100-101页 |
| 1.1 实验材料 | 第100-101页 |
| 1.2 实验设备 | 第101页 |
| 2. 实验方法 | 第101-104页 |
| 2.1 活性菌的准备 | 第101-102页 |
| 2.2 阳性菌的筛选 | 第102页 |
| 2.3 非变性电泳实验 | 第102-103页 |
| 2.3.1 非变性电泳实验 | 第102-103页 |
| 2.3.2 变性电泳实验 | 第103页 |
| 2.4 荧光显色实验及染色实验 | 第103-104页 |
| 3. 实验结果 | 第104-105页 |
| 4. 实验讨论 | 第105页 |
| 小结 | 第105-106页 |
| 总结 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-110页 |
| 附录1 | 第110-111页 |
| 附录2 | 第111-112页 |
| 附录3 综述 | 第112-122页 |
| 参考文献 | 第119-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第123页 |
