| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 冠状病毒的概述 | 第13-14页 |
| 1.2 TGE的流行性与危害性 | 第14-15页 |
| 1.3 冠状病毒的基因组复制 | 第15-20页 |
| 1.4 TGEV分子生物学研究进展 | 第20-22页 |
| 1.4.1 TGEV的基因组结构 | 第20页 |
| 1.4.2 结构基因 | 第20-22页 |
| 1.5 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)诊断方法研究进展 | 第22-23页 |
| 1.5.1 病原学检测 | 第22-23页 |
| 1.5.2 血清学检测 | 第23页 |
| 1.5.3 分子诊断技术 | 第23页 |
| 1.6 PL蛋白研究进展 | 第23-27页 |
| 1.6.1 nsp3的功能 | 第24-25页 |
| 1.6.2 SARS PL蛋白是一种蛋白酶,具有去泛素化和去DUB活性的酶 | 第25-26页 |
| 1.6.3 PL蛋白与固有免疫的关系 | 第26-27页 |
| 1.7 本实验的研究目的意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-39页 |
| 2.1 材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 质粒与菌种 | 第28页 |
| 2.1.2 样品的采集 | 第28页 |
| 2.1.3 常用生物学试剂 | 第28-30页 |
| 2.2 方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 样品的制备和病毒的分离 | 第30页 |
| 2.2.2 样品的PCR鉴定及电镜观察 | 第30页 |
| 2.2.3 总RNA的提取及反转录 | 第30-31页 |
| 2.2.4 TGEV测序引物的设计 | 第31-32页 |
| 2.2.5 TGEV全基因组的扩增 | 第32页 |
| 2.2.6 PCR产物纯化 | 第32页 |
| 2.2.7 目的基因DNA产物的连接与转化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 质粒的提取与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.9 TGEV遗传进化分析 | 第34-35页 |
| 2.2.10 TGEV与CCoV之间重组分析 | 第35页 |
| 2.2.11 荧光定量PCR引物的设计 | 第35-37页 |
| 2.2.12 猪天然免疫效应分子启动子荧光素酶报告载体的构建 | 第37页 |
| 2.2.13 固有免疫分子的克隆 | 第37-38页 |
| 2.2.14 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.2.15 荧光素酶报告基因实验 | 第38页 |
| 2.2.16 数据分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-64页 |
| 3.1 细胞病变的观察 | 第39页 |
| 3.2 样品PCR检测结果 | 第39-40页 |
| 3.3 TGEV电镜观察结果 | 第40页 |
| 3.4 TGEV基因组各片段的PCR扩增 | 第40-41页 |
| 3.5 TGEV进化树分析 | 第41-44页 |
| 3.6 TGEV-HX的序列分析 | 第44-45页 |
| 3.7 S蛋白抗原位点分析 | 第45页 |
| 3.8 TGEV-HX与CCoV重组分析 | 第45-46页 |
| 3.9 巴马猪猪IFN-α1,IFN-β启动子及其NF-κB结合位点荧光素酶报告系统的建立 | 第46-48页 |
| 3.10 巴马猪固有免疫分子的RT-PCR扩增 | 第48页 |
| 3.11 巴马猪固有免疫分子重组质粒酶切鉴定 | 第48页 |
| 3.12 巴马猪固有免疫分子同源性分析 | 第48-52页 |
| 3.12.1 TLR7同源性分析 | 第48-49页 |
| 3.12.2 TLR8同源性分析 | 第49-50页 |
| 3.12.3 TLR9同源性分析 | 第50页 |
| 3.12.4 VISA同源性分析 | 第50-51页 |
| 3.12.5 STING同源性分析 | 第51页 |
| 3.12.6 IRF3同源性分析 | 第51-52页 |
| 3.13 TGEV-HX感染PK-15固有免疫分子细胞因子荧光定量分析 | 第52-58页 |
| 3.13.1 IFN-α1的检测 | 第52页 |
| 3.13.2 IFN-β的检测 | 第52-53页 |
| 3.13.3 IL6的检测 | 第53页 |
| 3.13.4 TNF-α的检测 | 第53-54页 |
| 3.13.5 IL12的检测 | 第54-55页 |
| 3.13.6 ISG56的检测 | 第55-56页 |
| 3.13.7 IRF7的检测 | 第56页 |
| 3.13.8 STAT1的检测 | 第56-57页 |
| 3.13.9 Mx1的检测 | 第57-58页 |
| 3.14 木瓜样蛋白酶PL1对抗IFN-β通路的研究 | 第58-64页 |
| 3.14.1 PL1抑制IFN-β启动子 | 第58页 |
| 3.14.2 PL1蛋白抑制IRF3的转核 | 第58-59页 |
| 3.14.3 PL1与STING的关系 | 第59-60页 |
| 3.14.4 TGEV PL1突变体与IFN-β的关系 | 第60-61页 |
| 3.14.5 TGEV PL1的亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 3.14.6 TGEV PL1结合和去泛素化RIG-1和STING | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 TGEV HX的分离鉴定 | 第64页 |
| 4.2 TGEV HX的序列分析 | 第64-65页 |
| 4.3 巴马猪固有免疫分子序列分析 | 第65页 |
| 4.4 TGEV与细胞因子 | 第65-66页 |
| 4.5 TGEV PL1对抗IFN-β通路的研究 | 第66-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-86页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第86页 |
