| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 中文文摘 | 第5-10页 |
| 绪论 | 第10-20页 |
| 1. 灰盖鬼伞过氧化物酶的概述 | 第10-11页 |
| 1.1 灰盖鬼伞过氧化物酶 | 第10页 |
| 1.2 CiP的应用 | 第10-11页 |
| 1.3 CiP的研究进展 | 第11页 |
| 2. 毕赤酵母表达系统 | 第11-13页 |
| 2.1 毕赤酵母(Pichia pastoris) | 第11页 |
| 2.2 毕赤酵母宿主苗及表达载体 | 第11-12页 |
| 2.3 毕赤酵母表达系统对外源蛋白表达的影响 | 第12-13页 |
| 3. 毕赤酵母高密度发酵 | 第13-15页 |
| 4. 分子伴侣 | 第15-16页 |
| 4.1 内质网氧化还原酶1和二硫键异构酶 | 第15-16页 |
| 5. 表达蛋白的分离纯化 | 第16-17页 |
| 5.1 重组蛋白的特性分离方法的选择 | 第16页 |
| 5.2 重组蛋白分离纯化的持点 | 第16-17页 |
| 6. 论文的选题依据和意义 | 第17-18页 |
| 7. 本研究的主要内容 | 第18-20页 |
| 7.1 高表达菌株的构建 | 第18页 |
| 7.2 共表达Erol-PDI的CiP高产菌株5L发酵罐发酵工艺的优化 | 第18-19页 |
| 7.3 CiP纯化工艺的初步建立 | 第19-20页 |
| 第一章 CiP表达菌株的构建及共表达分子伴侣对其表达的影响 | 第20-32页 |
| 1. 材料与方法 | 第20-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2. 结果 | 第26-30页 |
| 2.1 重组蛋白表达载体的构建和表达 | 第26-28页 |
| 2.2 重组蛋白的鉴定 | 第28页 |
| 2.3 摇瓶水平检测分子伴侣对CiP表达影响 | 第28-29页 |
| 2.4 5L发酵罐表达CiP | 第29-30页 |
| 3. 小结 | 第30-32页 |
| 第二章 高产CiP菌株5L罐发酵工艺优化 | 第32-42页 |
| 1. 材料与方法 | 第32-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第32页 |
| 1.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 2. 结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.1 种子生长曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 2.2 不同pH对CiP表达的影响 | 第34-36页 |
| 2.3 不同诱导温度对CiP表达的影响 | 第36-38页 |
| 2.4 混合流加山梨醇 | 第38-40页 |
| 3. 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 重组蛋白CiP的分离纯化及部分酶学性质 | 第42-50页 |
| 1. 材料与方法 | 第42-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 1.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2. 结果分析 | 第44-49页 |
| 2.1 蛋白浓度标准曲线 | 第44页 |
| 2.2 CiP的脱盐过程 | 第44-45页 |
| 2.3 CiP的离子交换过程 | 第45-47页 |
| 2.4 CiP最适反应pH | 第47-48页 |
| 2.5 CiP最适反应温度 | 第48-49页 |
| 3. 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 1. 研究结论 | 第50-51页 |
| 2. 展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
| 个人简历 | 第62-64页 |
