| 中文摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 氧化应激 | 第13-16页 |
| 1.1.1 线粒体氧化应激 | 第13-14页 |
| 1.1.2 线粒体氧化应激与蛋白质损伤 | 第14页 |
| 1.1.3 氧化应激与脑缺血再灌注损伤 | 第14-15页 |
| 1.1.4 氧化应激与细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 1.2 细胞色素c氧化酶 | 第16-19页 |
| 1.2.1 细胞色素c氧化酶概述 | 第16-18页 |
| 1.2.2 细胞色素c氧化酶与线粒体氧化应激的关系 | 第18-19页 |
| 1.3 Sirt3 | 第19-21页 |
| 1.3.1 Sirt3 的概述 | 第19页 |
| 1.3.2 Sirt3 与氧化应激 | 第19-20页 |
| 1.3.3 Sirt3 与缺血/再灌注 | 第20-21页 |
| 1.4 立题依据 | 第21-22页 |
| 2 Sirt3 调控COX乙酰化在AAPH诱导细胞凋亡中的作用研究 | 第22-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.1.1 主要试剂与材料 | 第22-24页 |
| 2.1.2 细胞培养 | 第24-25页 |
| 2.1.3 siRNA转染敲除Sirt3 | 第25-26页 |
| 2.1.4 细胞色素c氧化酶活性测定 | 第26页 |
| 2.1.5 质粒转染过表达Sirt3 | 第26页 |
| 2.1.6 分离提取线粒体、细胞浆 | 第26-27页 |
| 2.1.7 Western blotting检测蛋白表达 | 第27-28页 |
| 2.1.8 免疫沉淀 | 第28页 |
| 2.1.9 数据统计与分析 | 第28-29页 |
| 2.2 实验结果 | 第29-35页 |
| 2.2.1 NAM抑制Sirt3 对COX乙酰化水平的影响 | 第29-30页 |
| 2.2.2 siRNA转染干扰Sirt3 后COX乙酰化水平的变化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 SiRNA转染干扰Sirt3 对COX-1 亚基的乙酰化水平的影响 | 第31页 |
| 2.2.4 过表达Sirt3 对COX-1 亚基的乙酰化水平的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.5 干扰Sirt3 后COX活性的变化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 沉默Sirt3 对细胞凋亡的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.7 siRNA转染沉默COX-1 亚基 | 第34-35页 |
| 2.2.8 siRNA转染沉默COX-1 亚基后对细胞凋亡的影响 | 第35页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 3 自由基AAPH诱导的NIH/3T3 细胞凋亡模型中Sirt3 对COX乙酰化的调控作用 | 第37-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 3.1.1 主要试剂与材料 | 第37-39页 |
| 3.1.2 MTT法测定AAPH对细胞增殖的抑制率 | 第39页 |
| 3.1.3 流式细胞仪检测ROS生成量 | 第39-40页 |
| 3.1.4 流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化 | 第40页 |
| 3.1.5 ATP生成量的测定 | 第40页 |
| 3.1.6 免疫沉淀及Western blotting蛋白分析 | 第40-41页 |
| 3.1.7 数据统计与分析 | 第41页 |
| 3.2 实验结果 | 第41-47页 |
| 3.2.1 AAPH对NIH/3T3 细胞的增殖具有抑制作用 | 第41-42页 |
| 3.2.2 AAPH对NIH/3T3 细胞内ROS生成量的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.3 AAPH对NIH/3T3 细胞线粒体膜电位变化的影响 | 第43页 |
| 3.2.4 AAPH诱导的氧化应激对ATP生成量的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.5 AAPH诱导的氧化应激对凋亡相关蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.6 AAPH诱导细胞凋亡对Sirt3 表达的影响 | 第45页 |
| 3.2.7 AAPH细胞凋亡模型中COX活性的改变 | 第45-46页 |
| 3.2.8 AAPH细胞凋亡模型中COX乙酰化水平的变化 | 第46-47页 |
| 3.2.9 AAPH细胞凋亡模型中COX-1 亚基乙酰化水平的影响 | 第47页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第47-49页 |
| 4 大鼠脑缺血再灌注模型中Sirt3 对COX乙酰化的调控作用 | 第49-58页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-52页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第49页 |
| 4.1.2 主要试剂与仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.3 主要试剂配制 | 第50-51页 |
| 4.1.4 实验动物模型建立 | 第51页 |
| 4.1.5 脑切片及染色 | 第51-52页 |
| 4.1.6 免疫沉淀及Western blotting分析 | 第52页 |
| 4.1.7 数据统计与分析 | 第52页 |
| 4.2 实验结果 | 第52-56页 |
| 4.2.1 I/R导致大鼠脑损伤情况 | 第52-53页 |
| 4.2.2 I/R对大鼠皮层ROS生成速率的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.3 I/R模型中大鼠皮层Sirt3 表达的变化 | 第54-55页 |
| 4.2.4 I/R对大鼠皮层COX活性的影响 | 第55页 |
| 4.2.5 I/R模型中COX-1 亚基乙酰化水平的变化 | 第55-56页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论和展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58-59页 |
| 5.2 创新和突破 | 第59页 |
| 5.3 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 在学期间发表论文 | 第71页 |
