| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1 植物光呼吸 | 第11-14页 |
| 1.1 光呼吸 | 第11-12页 |
| 1.2 光呼吸的生物学功能 | 第12-13页 |
| 1.2.1 光呼吸与植物生长发育的关系 | 第12页 |
| 1.2.2 光呼吸与植物逆境胁迫的关系 | 第12-13页 |
| 1.3 光呼吸途径的基因 | 第13-14页 |
| 1.3.1 SHMT1基因研究进展 | 第13页 |
| 1.3.2 GOX/GO基因研究进展 | 第13-14页 |
| 2 SGAT/AT2基因研究进展 | 第14-16页 |
| 2.1 SGAT/AT2基因的克隆及表达 | 第14-15页 |
| 2.2 SGAT与植物抗逆的关系 | 第15页 |
| 2.3 SGAT与植物抗病的关系 | 第15页 |
| 2.4 SGAT与GOX、SHMT关系 | 第15-16页 |
| 3 植物基因功能研究方法 | 第16-17页 |
| 3.1 基因过表达 | 第16页 |
| 3.2 基因沉默 | 第16-17页 |
| 3.2.1 病毒介导的基因沉默 | 第16-17页 |
| 3.2.2 CRISPR系统 | 第17页 |
| 3.2.3 RNA干扰 | 第17页 |
| 4 甜瓜遗传转化 | 第17-18页 |
| 5 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 6 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验内容 | 第20-59页 |
| 第一章 过表达AT2基因纯合株系烟草的筛选及获得 | 第20-26页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| 1.1 植物材料及菌株 | 第20页 |
| 1.2 培养基 | 第20页 |
| 1.3 仪器及设备 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-22页 |
| 2.1 T1代转化烟草的获得及卡那霉素抗性分析 | 第20-21页 |
| 2.2 植物基因组DNA、RNA提取及引物设计 | 第21-22页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 烟草基因DNA提取 | 第21-22页 |
| 2.3 阳性植株的鉴定 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-25页 |
| 3.1 抗卡那霉素浓度筛选 | 第22-23页 |
| 3.2 过表达AT2基因T1代烟草遗传分析 | 第23-24页 |
| 3.3 阳性过表达AT2基因植株鉴定 | 第24页 |
| 3.4 过表达AT2基因烟草纯合株系获得 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 第二章 甜瓜的遗传转化 | 第26-34页 |
| 1 材料与方法 | 第26-29页 |
| 1.1 材料 | 第26页 |
| 1.1.1 菌株 | 第26页 |
| 1.1.2 种质 | 第26页 |
| 1.1.3 试剂 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-29页 |
| 1.2.1 甜瓜种子消毒 | 第26页 |
| 1.2.2 农杆菌菌液获得 | 第26-27页 |
| 1.2.2.1 YEB培养基的制备 | 第26-27页 |
| 1.2.2.2 抗生素配制 | 第27页 |
| 1.2.3 农杆菌菌液获得 | 第27页 |
| 1.2.4 甜瓜外植体的获得 | 第27页 |
| 1.2.5 甜瓜的遗传转化 | 第27-28页 |
| 1.2.5.1 激素配制 | 第27-28页 |
| 1.2.5.2 预培养 | 第28页 |
| 1.2.5.3 农杆菌侵染 | 第28页 |
| 1.2.5.4 筛选 | 第28页 |
| 1.2.5.5 拟阳性甜瓜芽伸长培养 | 第28页 |
| 1.2.5.6 拟阳性甜瓜生根培养 | 第28页 |
| 1.2.6 阳性转基因甜瓜的鉴定 | 第28-29页 |
| 1.2.6.1 甜瓜基因组的提取 | 第28-29页 |
| 1.2.6.2 转基因甜瓜的鉴定 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-32页 |
| 2.1 甜瓜遗传转化条件筛选 | 第29-31页 |
| 2.1.1 预培养甜瓜6-BA最佳浓度 | 第29-30页 |
| 2.1.2 甜瓜苗龄对外植体生长的影响 | 第30页 |
| 2.1.3 甜瓜侵染最适农杆菌浓度 | 第30-31页 |
| 2.2 甜瓜阳性植株获得 | 第31-32页 |
| 2.2.1 甜瓜遗传转化 | 第31-32页 |
| 2.2.2 阳性过表达AT2甜瓜的鉴定 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 盐胁迫对过表达AT2基因烟草的影响 | 第34-43页 |
| 1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 1.1 材料 | 第34页 |
| 1.2 方法 | 第34-35页 |
| 1.2.1 过表达AT2基因烟草盐胁迫 | 第34页 |
| 1.2.1.1 过表达烟草T1盐胁迫 | 第34页 |
| 1.2.1.2 过表达烟草纯合株系盐胁迫 | 第34页 |
| 1.2.2 盐胁迫生理生化指标测定 | 第34-35页 |
| 1.2.2.1 盐胁迫丙二醛含量测定 | 第34-35页 |
| 1.2.2.2 盐胁迫电导率测定 | 第35页 |
| 1.2.2.3 盐胁迫SGAT酶活测定 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.1 过表达AT2基因烟草T1盐胁迫 | 第35-39页 |
| 2.1.1 盐胁迫过表达AT2基因烟草T1发芽率 | 第35-37页 |
| 2.1.2 盐胁迫过表达AT2基因烟草生理生化指标 | 第37-39页 |
| 2.1.2.1 盐胁迫过表达AT2基因烟草T1代MDA含量测定 | 第37页 |
| 2.1.2.2 盐胁迫过表达AT2基因烟草T1代电导率含量测定 | 第37-38页 |
| 2.1.2.3 盐胁迫过表达AT2基因烟草T1代SGAT酶活性测定 | 第38-39页 |
| 2.2 过表达AT2基因T2纯合株系盐胁迫 | 第39-41页 |
| 2.2.1 盐胁迫过表达AT2基因T2纯合株系表型 | 第39-40页 |
| 2.2.2 盐胁迫过表达AT2基因T2纯合株系膜质过氧化指标 | 第40页 |
| 2.2.3 盐胁迫过表达AT2基因T2纯合株系AT2基因表达量 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 病原菌胁迫对过表达烟草的影响 | 第43-50页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 方法 | 第43-44页 |
| 1.2.1 PDA培养基配制 | 第43页 |
| 1.2.2 赤星病病原菌接种过表达AT2基因T2纯合株系烟草 | 第43页 |
| 1.2.3 病原菌胁迫过表达AT2基因T2纯合株系烟草酶活性测定 | 第43-44页 |
| 1.2.3.1 病原菌胁迫过表达AT2基因T2纯合株系烟草SOD酶活性测定 | 第43-44页 |
| 1.2.3.2 病原菌胁迫过表达AT2基因T2纯合株系烟草POD酶活性测定 | 第44页 |
| 1.2.3.3 病原菌胁迫过表达AT2基因T2纯合株系SGAT酶活性测定 | 第44页 |
| 1.2.3.4 病原菌胁迫过表达AT2基因T2纯合株系烟草H2O2活性测定 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-48页 |
| 2.1 过表达AT2基因T2纯合株系烟草赤星病抗性鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病SGAT酶活性测定 | 第45-46页 |
| 2.3 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病保护酶活性测定 | 第46-48页 |
| 2.3.1 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病SOD活性 | 第46-47页 |
| 2.3.2 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病POD活性 | 第47页 |
| 2.3.3 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病H2O2活性 | 第47-48页 |
| 2.4 过表达AT2基因T2纯合株系烟草接种赤星病AT2、SHMT1、GOX基因表达量 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 AT2基因表达模式分析 | 第50-59页 |
| 1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 1.1 材料 | 第50页 |
| 1.2 方法 | 第50-51页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第50页 |
| 1.2.2 AT2基因生物信息学预测 | 第50-51页 |
| 1.2.3 AT2、SHMT1及GOX基因RT-PCR分析 | 第51页 |
| 1.2.3.1 甜瓜RNA提取及反转录 | 第51页 |
| 1.2.3.2 RT-PCR扩增程序 | 第51页 |
| 1.2.4 SA处理甜瓜叶片 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-56页 |
| 2.1 AT2基因启动子区生物信息学分析 | 第51-54页 |
| 2.1.1 AT2基因启动子区及预测 | 第51-52页 |
| 2.1.2 AT2基因启动子区功能元件分析 | 第52-54页 |
| 2.2 甜瓜AT2、SHMT1、GOX基因RT-PCR分析 | 第54-56页 |
| 2.2.1 PCR鉴定AT2、SHMT1、GOX基因引物特异性 | 第54-55页 |
| 2.2.2 甜瓜AT2、SHMT1、GOX基因表达量 | 第55-56页 |
| 2.2.3 外源SA对甜瓜AT2基因表达量影响 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| 第三部分 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 研究生期间发表论文 | 第73-74页 |
