| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-36页 |
| 1.1 线粒体基因组及线粒体核修饰基因 | 第13-30页 |
| 1.1.1 线粒体基因组及其突变导致的疾病 | 第13-16页 |
| 1.1.2 线粒体疾病的致病机理 | 第16-19页 |
| 1.1.3 线粒体tRNAs(mt-tRNAs)及其修饰 | 第19-21页 |
| 1.1.4 mt-tRNAs U34位的修饰途径及相应的修饰酶 | 第21-23页 |
| 1.1.5 线粒体tRNAs修饰酶TRMU,GTPBP3和MTO1的结构分析及其互作 | 第23-26页 |
| 1.1.6 GTPBP3,MTO1和TRMU三基因突变导致的人类疾病 | 第26-29页 |
| 1.1.7 线粒体逆行信号通路(Retrograde Pathway)在线粒体相关疾病中的作用 | 第29-30页 |
| 1.2 斑马鱼在研究线粒体疾病中的应用 | 第30-32页 |
| 1.3 Cas9基因修饰技术简介 | 第32-34页 |
| 1.4 课题意义与展望 | 第34-36页 |
| 第2章 实验材料 | 第36-42页 |
| 2.1 实验质粒 | 第36-37页 |
| 2.2 实验菌株和斑马鱼 | 第37页 |
| 2.2.1 克隆菌株 | 第37页 |
| 2.2.2 斑马鱼品系 | 第37页 |
| 2.3 实验试剂和仪器 | 第37-42页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.3.2 实验试剂的配制 | 第38-40页 |
| 2.3.3 试剂盒 | 第40页 |
| 2.3.4 实验仪器 | 第40-42页 |
| 第3章 实验方法 | 第42-62页 |
| 3.1 斑马鱼gtpbp3,mto1和trmu基因的生物信息学预测和克隆 | 第42-47页 |
| 3.1.1 3基因生物信息学分析及同源比对 | 第42页 |
| 3.1.2 斑马鱼中3基因的cDNA克隆 | 第42-44页 |
| 3.1.3 质粒的构建与提取 | 第44-47页 |
| 3.2 gtpbp3,mto1和trmu在斑马鱼中的时空表达分析 | 第47-54页 |
| 3.2.1 时间表达Northern分析 | 第47-49页 |
| 3.2.2 时间表达Western分析 | 第49-51页 |
| 3.2.3 组织特异性表达整体原位杂交(WISH)分析 | 第51-53页 |
| 3.2.4 成鱼器官特异性表达qRT-PCR分析 | 第53-54页 |
| 3.3 gtpbp3,mto1和trmu基因敲除斑马鱼的构建及其鉴定 | 第54-58页 |
| 3.3.1 Cas9-mRNA合成 | 第54-55页 |
| 3.3.2 Guide RNA合成 | 第55-56页 |
| 3.3.3 斑马鱼鱼卵显微注射 | 第56-58页 |
| 3.4 gtpbp3,mto1和trmu基因敲除斑马鱼表型分析及分子生化分析 | 第58-62页 |
| 3.4.1 3基因敲除斑马鱼胚胎、器官发育分析 | 第58-59页 |
| 3.4.2 线粒体tRNA稳态分析 | 第59-61页 |
| 3.4.3 斑马鱼胚胎ATP生成分析 | 第61-62页 |
| 第4章 实验结果及讨论 | 第62-77页 |
| 4.1 gtpbp3,mto1和trmu基因生物信息学分析及同源比对 | 第62-66页 |
| 4.2 gtpbp3,mto1和trmu在斑马鱼中的时空表达分析 | 第66-69页 |
| 4.2.1 时间表达Northern分析 | 第66页 |
| 4.2.2 时间表达Western分析 | 第66页 |
| 4.2.3 时空表达整体原位杂交(WISH)分析 | 第66-67页 |
| 4.2.4 成鱼器官特异性表达qRT-PCR分析 | 第67-69页 |
| 4.3 gtpbp3,mto1和trmu基因敲除斑马鱼的筛选和鉴定 | 第69-72页 |
| 4.4 gtpbp3,mto1和trmu基因敲除斑马鱼表型分析及分子生化分析 | 第72-75页 |
| 4.4.1 基因敲除斑马鱼胚胎、器官发育分析 | 第72-73页 |
| 4.4.2 线粒体tRNA-Northern稳态分析 | 第73-74页 |
| 4.4.3 斑马鱼胚胎ATP生成分析 | 第74-75页 |
| 4.5 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
