| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-35页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 1.2 国内外研究综述 | 第16-33页 |
| 1.2.1 生物农药 | 第16-17页 |
| 1.2.2 丝状真菌聚酮合成酶 | 第17-21页 |
| 1.2.3 丝状真菌聚酮化合物及次级代谢途径 | 第21-28页 |
| 1.2.4 真菌聚酮合成酶与产物合成相关性 | 第28-30页 |
| 1.2.5 次级代谢产物产量的影响因素研究 | 第30-32页 |
| 1.2.6 木霉聚酮合成酶基因研究进展 | 第32-33页 |
| 1.3 本文的主要研究内容和技术路线 | 第33-35页 |
| 1.3.1 课题来源 | 第33页 |
| 1.3.2 本文的主要研究内容 | 第33-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-38页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35页 |
| 2.1.2 培养基 | 第35-37页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-61页 |
| 2.2.1 哈茨木霉基因组 DNA 的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.2 pkst-1 和 pkst-2 基因的 DNA 序列扩增 | 第39页 |
| 2.2.3 哈茨木霉总 RNA 提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4 总 RNA 逆转录 PCR | 第40页 |
| 2.2.5 RNAi 表达载体及过表达载体构建 | 第40-44页 |
| 2.2.6 敲除表达载体及过表达载体构建 | 第44-50页 |
| 2.2.7 哈茨木霉原生质体转化法 | 第50页 |
| 2.2.8 根癌农杆菌介导哈茨木霉转化体系建立 | 第50-53页 |
| 2.2.9 Southern 印迹杂交鉴定转化子菌株 | 第53-54页 |
| 2.2.10 相对实时定量 PCR 分析 | 第54页 |
| 2.2.11 代谢产物萃取及 LC/MS 测定 | 第54-56页 |
| 2.2.12 哈茨木霉对病原真菌抑菌效率 | 第56-57页 |
| 2.2.13 pkst 基因表达的动态监测 | 第57页 |
| 2.2.14 发酵条件对哈茨木霉的影响 | 第57-59页 |
| 2.2.15 哈茨木霉 T5 发酵产 monocillinⅠ优化设计 | 第59-61页 |
| 第3章 pkst-1 基因的克隆及功能研究 | 第61-84页 |
| 3.1 pkst-1 基因的克隆及分析 | 第61-67页 |
| 3.1.1 pkst-1 基因的克隆 | 第62-64页 |
| 3.1.2 聚酮合成酶 PKST-1 蛋白结构分析 | 第64-67页 |
| 3.2 pkst-1 基因的功能分析 | 第67-83页 |
| 3.2.1 哈茨木霉转化效率影响因素 | 第68-71页 |
| 3.2.2 pkst-1 基因 RNAi 表达载体构建及沉默效应 | 第71-77页 |
| 3.2.3 pkst-1 基因过表达载体构建及其表达分析 | 第77-80页 |
| 3.2.4 pkst-1 基因在 monocillinⅠ合成途径中的功能 | 第80-82页 |
| 3.2.5 pkst-1 基因对哈茨木霉发酵产 monocillinⅠ的影响 | 第82-83页 |
| 3.3 本章小结 | 第83-84页 |
| 第4章 pkst-2 基因功能鉴定及基因工程菌株的构建 | 第84-104页 |
| 4.1 pkst-2 基因的克隆与分析 | 第84-89页 |
| 4.1.1 pkst-2 基因的克隆 | 第84-86页 |
| 4.1.2 聚酮合成酶 PKST-2 的结构分析 | 第86-89页 |
| 4.2 pkst-2 基因的功能分析 | 第89-102页 |
| 4.2.1 pkst-2 基因敲除表达载体构建及转化子菌株获得 | 第90-96页 |
| 4.2.2 pkst-2 基因过表达载体的构建及表达分析 | 第96-98页 |
| 4.2.3 pkst-2 基因在 monocillinⅠ合成途径中的功能分析 | 第98-101页 |
| 4.2.4 pkst-2 基因对哈茨木霉发酵产 monocillinⅠ的影响 | 第101-102页 |
| 4.3 本章小结 | 第102-104页 |
| 第5章 pkst 基因转化子菌株的生物学特性研究 | 第104-119页 |
| 5.1 pkst 基因转化子抑菌机理研究 | 第104-111页 |
| 5.1.1 pkst-1 基因突变对抑菌活性的影响 | 第104-105页 |
| 5.1.2 pkst-2 基因转化子 T5 的抑菌活性研究 | 第105-107页 |
| 5.1.3 pkst 基因表达的动态分析 | 第107-108页 |
| 5.1.4 pkst-2 基因过表达转化子的抑菌效果 | 第108-111页 |
| 5.2 哈茨木霉 T5 的表型分析 | 第111-117页 |
| 5.2.1 pkst-2 基因过表达对哈茨木霉表型影响 | 第111页 |
| 5.2.2 环境因素对哈茨木霉 T5 生长影响 | 第111-114页 |
| 5.2.3 营养因素对哈茨木霉 T5 生长影响 | 第114-117页 |
| 5.3 本章小结 | 第117-119页 |
| 第6章 哈茨木霉 T5 发酵条件优化 | 第119-140页 |
| 6.1 哈茨木霉 T5 产 monocillinⅠ发酵参数优化研究 | 第119-125页 |
| 6.1.1 发酵参数对 monocillinⅠ产量的影响 | 第119-121页 |
| 6.1.2 MonocillinⅠ摇瓶发酵参数的优化设计 | 第121-124页 |
| 6.1.3 MonocillinⅠ发酵回归模型验证 | 第124-125页 |
| 6.2 哈茨木霉 T5 发酵产 monocillinⅠ培养基优化 | 第125-138页 |
| 6.2.1 营养因素对 monocillinⅠ产量的影响 | 第125-130页 |
| 6.2.2 MonocillinⅠ摇瓶发酵培养基优化设计 | 第130-136页 |
| 6.2.3 MonocillinⅠ发酵回归方程验证 | 第136-138页 |
| 6.3 本章小结 | 第138-140页 |
| 结论 | 第140-142页 |
| 参考文献 | 第142-158页 |
| 附图 | 第158-167页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第167-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 个人简历 | 第170页 |
